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酪蛋白磷酸肽和维生素c联合应用对大鼠骨密度的影响 2002年至2005年，中国的骨质疏松症死亡率为8.8%，被列入慢性疾病病例3%。国际骨质疏松基金会的统计数据显示, 骨质疏松症目前危害着全球大约三分之一50岁以上的女性和五分之一50岁以上的男性。由此可见, 骨质疏松症已成为一种世界范围的健康问题。为此, 1997年世界卫生组织 (WHO) 将每年的10月20日定为“世界骨质疏松日”, 意在提高人们对骨质疏松症的认识。对骨质疏松症的预防主要在于保持良好的生活习惯、均衡饮食、适量运动、补充体内钙质等。但现有的补钙产品如碳酸钙、L-苏糖酸钙、氨基酸螯合钙、动物骨源钙制剂等补钙产品普遍存在吸收率不理想、影响补钙效果的情况。现已证实酪蛋白磷酸肽 (CPP) 可作为无机离子的载体促进肠膜对钙等矿物质的吸收与利用;维生素C作为一种重要的还原剂, 在骨盐代谢及骨质生成中具有重要作用。但酪蛋白磷酸肽、维生素C联合应用对钙骨骼生物效应的影响鲜见报道。 1 材料和方法 1.1 材料表面 1.1.1 碳酸钙、养蛋白、维生素c 高效补钙胶囊由山东省疾病预防控制中心配制, 内容物为碳酸钙、酪蛋白磷酸肽、维生素C等。人体推荐剂量为0.06 g/kg BW, 其中钙、酪蛋白磷酸肽、维生素C分别为6.97、2.67、2.67 mg/kg BW。 1.1.2 华曲阜康生物科技股份有限公司 选用SPF级出生4周左右的断乳Wistar雄性大鼠, 体重60~75 g, 购自北京华阜康生物科技股份有限公司[许可证号:SCXK (京) 2009-0015]。饲养于山东省疾病预防控制中心屏障级动物房[许可证号:SYXK (鲁) 2008-0005], 环境温度 (22±2) ℃, 相对湿度 (50±10) %。 1.1.3 动物解剖器械动物 周围型双能X线骨密度仪 (美国NORLAND-Stratec) 、动物解剖器械、动物天平。 碳酸钙标准溶液 (编号:BW3011) 、EDTA标准溶液 (编号:GF223) 均购自国家标物中心, 氢氧化钾。 1.2 方法 1.2.1 大鼠血钙水分等指标检测 Wistar雄性大鼠经1周适应期后, 禁食12 h, 称重, 根据体重随机分为低钙对照组、碳酸钙对照组、低、中、高剂量组, 每组10只。 高效补钙胶囊人体推荐每日摄入量为0.06 g/kg BW, 以相当于人体推荐量的5、10、30倍设定大鼠的低、中、高剂量组, 即0.3、0.6、1.8 g/kg BW。各组均饲喂低钙基础饲料, 饮用去离子水。剂量组灌胃给予大鼠相应浓度受试物1次/d;碳酸钙对照组灌胃522.5 mg/kg BW碳酸钙1次/d (含钙量与高剂量组相同, 其中钙含量为40%, 即209 mg/kg BW) ;低钙对照组以等体积的去离子水代替受试物灌胃。连续给予3个月后测试骨密度功能等各项指标。 低钙基础饲料按照《保健食品检验与评价技术规范》 (2003年版)要求配置。 1.2.2 低血钙基础饲料的钙含量测定 体重测定:禁食12 h后, 测定体重, 1次/周。 股骨重量测定:动物饲养3个月后处死, 剥离出右侧股骨, 105℃烘至恒重, 称量骨干重。 骨钙含量及饲料中钙含量测定:低钙基础饲料样品经均匀混合, 105℃烘干, 置干燥器中冷却后研磨。取大鼠右侧股骨于105℃烘至恒重, 称量骨干重, 然后粉碎、研磨、消化。用EDTA滴定法测定低钙基础饲料和股骨样品中钙含量。低钙基础饲料中钙含量为146.0 mg/100 g。 股骨骨密度测定:用周围型双能X线骨密度仪测量左侧股骨中点及股骨远心端的骨密度。 1.3 次统计学处理 采用SPSS软件进行统计分析, 采用方差分析, 先进行方差齐性检验, 方差齐, 计算F值, 如果F值F0.05, P0.05, 结论:各组均数间差异无统计学意义;如果F值≥F0.05, P≤0.05, 则用多个试验组和1个对照组间均数的两两比较方法 (q检验, Newman-keuls法) 进行统计学分析;对非正态或方差不齐的数据用秩和检验进行统计。 2 结果 2.1 试剂组与低钙对照组大鼠体重比较 各剂量组大鼠的初始体重与低钙对照组比较差异无统计学意义 (P0.05) 。3个月的饲养过程中, 第4周、第8周以及第12周, 各组大鼠体重均匀增长, 试剂组大鼠体重与低钙对照组比较差异均无统计学意义 (P0.05) 。详见表1。 2.2 学意义p0.1 与低钙对照组比较, 各剂量组和碳酸钙组股骨重量差异均有统计学意义 (P0.01) 。与碳酸钙对照组比较, 中、高剂量组股骨重量差异有统计学意义 (P0.05) , 而低剂量组股骨重量差异无统计学意义 (P0.05) 。详见表2。 2.3 碳酸钙对照组与高、中剂量组患者的股骨钙含量比较 与低钙对照组比较, 低、