化妆品急性经口毒性试验 上下增减剂量法、固定剂量法、急性毒性分类法、体内彗星试验.docxVIP

急性经口毒性试验 上下增减剂量法 　　　　　13.急性经口毒性试验 固定剂量法 　　　　　14.急性经口毒性试验 急性毒性分类法 　　　　　15.体内彗星试验 附件12 急性经口毒性试验 上下增减剂量法 Acute Oral Toxicity Test Up-and Down Procedure 1 范围 本方法规定了急性经口毒性试验 上下增减剂量法（上下法）的基本原则、要求和方法。 本方法适用于化妆品原料安全性毒理学检测。 2 试验目的 急性经口毒性试验是评估化妆品原料毒性特性的第一步，通过短时间经口染毒可提供对健康危害的信息。试验结果可作为化妆品原料毒性分级和标签标识以及确定亚慢性毒性试验和其他毒理学试验剂量的依据。 3 定义 3.1 急性经口毒性 acute oral toxicity 一次或在24 h内多次经口给予实验动物受试物后，动物在短期内出现的健康损害效应。 3.2 经口半数致死量（LD50）oral medium lethal dose 经口一次给予受试物后，引起实验动物总体中半数死亡的毒物的统计学剂量。以单位体重接受受试物的重量(mg/kg或g/kg)来表示。 3.3 延迟死亡 delayed death 设定的给药间隔（通常为48 h）内不引起受试动物死亡或出现濒死状态，但在14 d的观察期间内出现死亡。 3.4 剂量级数因子 dose progression factor 也称为剂量步进因子。是指主试验中，当前剂量的一只动物存活或死亡时，下一只动物染毒剂量增加或降低倍数。剂量级数因子建议为1/（估计的剂量-反应曲线斜率）的反对数。默认的剂量级数因子为3.2，即0.5（1/2）的反对数。 3.5 限值剂量 limit dose 受试动物进行急性经口毒性试验的上限剂量（2000 mg/kg或5000 mg/kg）。 3.6 逆转 reversal 是指在某个染毒剂量下观察动物无反应，在下一个染毒剂量下观察动物有反应的现象，反之亦然（也就是前一个动物发生反应，后一个动物无反应）。因此，一对不同的动物染毒反应情况产生一个逆转。 3.7 名义受试动物量 nominal sample size 是指受试动物的总数量按下列规则减去一定量动物数：（1）减去染毒序列开始时出现相同反应的最后1只动物之前的受试动物数量，（2）或减去第一次发生逆转的一对动物之前受试动物的数量。如在一个模拟序列：OOOXXOXO中（X表示死亡，O表示存活），此时，受试动物的总数量（或常规意义的动物数）是8，名义受试动物量是6。 3.8 概率 probit 是“概率积分转换（probability integral transformation）”术语的缩写，预期反应与剂量（通常为对数值）呈标准正态分布（对称轴为反应均值，尺度参数为标准差σ），剂量反应模型的概率可以通过其与σ的倒数成直线关系进行分析。致死量的标准正态分布曲线是对称的，曲线的中值就是真实LD50或中位值。 3.9 标准偏差（σ） standard deviation 是一个对数正态曲线的标准偏差，用来描述受试动物对受试物的耐受范围（如染毒剂量超过耐受剂量，受试动物预期能发生反应）。预估的σ值可以预测受试动物对整个染毒剂量区间发生反应的变异性。 3.10 斜率（剂量-反应曲线） slope (of the dose-response curve) 剂量反应曲线的斜率，是反应曲线相对于剂量数轴的倾斜程度。在进行概率分析时，用概率值表示的反应相对于对数剂量呈直线关系，此时，斜率是σ的倒数（σ是表示受试动物耐受性正态分布的标准偏差）。 4 试验的基本原则 该方法旨在以最小量的动物测出化妆品原料的急性经口毒性，适合于能引起动物快速死亡的受试物。按照预定的试验规则和程序，以管饲法经口给予受试物。染毒后观察动物的毒性反应和死亡情况。试验期间死亡的动物要进行尸检，试验结束时仍存活的动物要处死并进行尸检。本方法主要适用于啮齿类动物的研究，通常选用雌性大鼠。也可选用其他啮齿类动物。 该方法分为限量试验（limit test）和主试验（main test）。限量试验用不多于5只动物评价受试物LD50是否高于限值剂量（2000 mg/kg，或5000 mg/kg），主要用于有资料提示受试物毒性可能较小的情况。主试验采用一个单一剂量级数染毒序列，每次一只动物，根据动物的存活情况确定下一只动物的染毒剂量，染毒间隔通常为48 h。当满足停止规则之一时，停止染毒，采用最大似然法对LD50进行计算。根据试验结果对LD50和置信区间进行评估。 本方法给出了试验停止规则和LD50计算方法，实际工作中可采用计算机化的程序进行剂量设计和结果计算。 5 试验方法 5.1 受试物 受试物应溶解或