dpp-4抑制剂aloglipin对溃疡性结肠炎小鼠模型的治疗机制.docxVIP

dpp-4抑制剂aloglipin对溃疡性结肠炎小鼠模型的治疗机制 炎症包括溃疡性胃炎（iu）和克罗恩病（cd）。mc以大便粘膜炎症为特征，克罗恩病以斑状板和透壁炎症为特征，可影响消化系统的任何部位。炎症性肠病在发病机制上属自身免疫疾病, 临床表现为反复发作的慢性炎症性肠道疾病。近年来有研究发现, 胰高血糖素样肽-2 (glucagon-like peptide-2, GLP-2) 具有促进肠黏膜增长, 抑制炎性介质表达的作用, 二肽基肽酶-4 (dipeptidyl peptidase-4, DPP-4) 抑制剂能够通过抑制DPP-4酶而达到降低GLP-2降解失活的作用, 这为炎症性肠病的治疗开辟新的途径。Alogliptin为日本武田公司开发的一种用于治疗2型糖尿病的DPP-4高选择性抑制剂, 而对于其治疗炎症性肠病的作用还少见报道。本研究通过TNBS灌肠诱导小鼠产生溃疡性结肠炎模型, 观察Alogliptin对模型小鼠MPO值, 血清IL-8、TNF-α和GLP-2的影响, 探讨其治疗炎症性肠病的治疗机制。 1 材料和方法 1.1 羧甲基纤维素钠混悬液的配制 Alogliptin由重庆医药工业研究院提供, 通过成分鉴定和含量分析, 临用时以0.5%羧甲基纤维素钠配成相应质量浓度的混悬液备用。柳氮磺吡啶 (SASP, 250 mg/片, 上海三维制药有限公司生产, 批号:200903C18) 用刀片刮去包衣, 呈现黄褐色, 研碎后加0.5% CMC-Na配成26 g/L的混悬液备用。 1.2 试剂盒和试剂 成年雄性清洁级BALB/c小鼠48只, 体质量 (25±3) g, 由重庆医科大学实验动物中心提供;50 g/L 2, 4, 6-三硝基苯磺酸 (2, 4, 6-TNBS) 购自美国Sigma公司, 髓过氧化物酶 (myeloperoxidase, MPO) 试剂盒为南京建成生物工程研究所产品, IL-8检测试剂盒胰高血糖素肽酶2检测试剂盒 (glucagon-like peptide 2, GLP-2) 购于重庆升博试剂公司, 肿瘤坏死因子α (TNF-α) 试剂盒购于上海亿欣生物试剂公司, 低温冷冻离心机购于Thermo公司, 酶标仪购于Perkin Elmer公司。 1.3 模型分组与饲养 将BALB/c小鼠分成A、B、C、D、E、F组, 每组8只, A、B、C组分别为Alogliptin 1、0.3、0.1 mg/kg剂量组, D组为SASP治疗阳性对照组 (SASP 520 mg/kg) , E组为模型对照组, F组为空白组。将BALB/c小鼠禁食不禁水16 h后, 用乙醚轻度麻醉, 用直径约为2 mm的导管经肛门插入结肠约4 cm, A、B、C、D、E组每只小鼠注入70 mg/kg的TNBS, F组每只小鼠注入等体积的生理盐水, 将小鼠肛门捏住倒提5 min, 待药物完全吸收后放入笼中继续饲养。灌肠结束后6 h, 分别灌胃给予Aloglitpin、柳氮磺吡啶, 连续治疗7 d后眼球取血测定血清IL-8、TNF-α和GLP-2值, 处死小鼠, 取结肠组织测定MPO值。 1.4 形态变异检测 每日观察和记录小鼠的体质量和大便情况, 疾病活动度指数 (DAI) = (体质量减轻率分数+粪便性状分数+隐血程度分数) /3, DAI评分标准见表1;药物治疗7 d后摘眼球取血, 静置30 min后, 4 ℃ 3 000 r/min离心20 min。处死小鼠, 取结肠组织分为2份, 一份做HE染色, 观察结肠损伤状况, 另一份冻存于液氮中备用于MPO值检测。大便隐血检测采用联苯胺法。 1.5 血清il-8、tnf-i和glp-2的血清含量 结肠组织MPO值检测, 血清IL-8、TNF-α、GLP-2检测参照检测试剂盒说明书。 1.6 统计分析 应用SPSS 13.0统计软件进行分析, 数据以xˉ±s表示, 组间比较采用方差分析和t检验。 2 结果 2.1 小鼠稀便及采血指标 TNBS模型组小鼠出现体质量下降、稀便、便血、懒动、毛发散乱等, 而Alogliptin治疗组和SASP治疗组小鼠稀便及便血情况明显减轻, DAI评分较模型组有显著降低 (P0.01) , 而Alogliptin高剂量治疗组和柳氮磺吡啶治疗组无显著性差异 (P0.05) 。见图1。 2.2 小鼠结肠组织病理学检测 正常组小鼠结肠黏膜上皮完整、连续, 细胞与腺体排列规则, 黏膜、固有层内血管和纤维间质正常, 肌层无异常;模型组小鼠结肠黏膜充血水肿, 大量炎性细胞浸润, 肠壁增厚, 腺体中杯状细胞明显减少;Alogliptin高、中、低治疗组和柳氮磺吡啶治疗组与模型组比均有不同程度的减轻, 特别是Alogliptin高剂量组和SASP治疗组, 除局部伴有