园艺植物的生物技术研究完整版.pptxVIP

园艺植物研究法园艺植物的生物技术研究 生物技术? 以满足人类不同层次生活需求为目的的对生命活 动形式的研究、探索、改造、利用的所有相关技 术都属于生物技术的范畴。? 生物技术产业特征：高投入、高效益、短周期 ? 生物技术的主要类型：细胞工程、基因工程、酶工程、发酵工程、代谢工程 细胞工程应用细胞生物学和分子生物学的方法，在细胞 水平进行的遗传操作。包括快繁、脱毒、细胞 培养、花药培养、原生质体培养及融合等 ?组织培养成功的植物已超过600种；?花药培养再生的植物超过200种；?原生质体培养成功的植物超过100种 基因工程人类按照设计，将某种生物的基因分离出来， 借助基因重组技术与载体分子组成重组DNA， 或采用直接导入的技术，将目的基因引入受 体细胞，使后者迅速、定向地获得新的遗传 性状或成为一种新型的生物物（品）种分为动物基因工程、植物基因工程、微生物 基因工程和病毒基因工程 二、园艺植物生物技术研究园艺植物生物技术的种类、应用和 研究方法。 提纲2.1 园艺植物组织培养及其应用2.2 原生质体培养、再生、融合技术 2.3 分子标记的应用2.4 基因工程 2.1 园艺植物组织培养? 在离体条件下，使园艺植物的 某一器官、组织或细胞增殖和 再生的技术。? 这一技术的理论基础是植物细 胞的全能性假说。 植物细胞的全能性假说/ 植物组织培养的要素外植体无菌操作培养基诱导、培养、再生条件 植物组织培养的关键环节 1、实验室建设2、培养基的选择及培养基配制3、接种所用的材料与材料的接种方法 4、激素的使用与培养物的再生5、试管苗的生根与移栽 实验室建设? 实验室：培养基准备室、接种室、培养室、观 察分析室。? 设备：灭菌锅、超净工作台、天平和显微镜。 ? 要求：接种室和超净工作台提供一个无菌的条件。培养室要求温度恒定，一般是25－28℃， 光照时数和强度可控。 培养基的选择及配制? 培养基：为外植体生长提供碳素营养、水份、 矿质元素、激素、维生素及其它有机营养的介 质。按状态分为液体培养基和固体培养基两类。? 激素的使用：培养基中常常要加入植物（外源） 激素才能使外植体产生愈伤组织或启动分裂。 培养基的主要成分及种类 大量元素：N、P、K、Mg、Ca、Fe（与EDTA螯合） 微量元素：I、Cu、Mo、Zn、CoB族维生素、维生素C、甘氨酸、肌醇、激素 培养基的配制1)母液配制? N、P、K、Mg、Ca盐按顺序配在一起，浓度为使用时的10倍? Fe盐常与EDTA（乙二胺四乙酸钠）配在一起，配成100倍母液 ? 微量元素（I、Cu、Mo、Zn、Co）、B族维生素、维生素C、甘氨酸、肌醇分别配成100倍。2)激素类根据使用浓度，可配成100倍左右的母液。3) 母液保存在4℃冰箱中，可使用1-2个月。4)园艺植物常用的基本培养基：MS，Murashige和Skoog于1962 年为烟草细胞培养设计，适用于蔬菜、花卉的组织培养； MT， 适用于柑橘的组织培养。 培养基的配制5）使用前，取母液稀释、加入蔗糖，定容后测定pH值。 pH值在5.8-6.0之间； 5.8，固体培养基偏软； 6.0，固体培养基偏硬。? 过酸或过碱时，分别用1N NaOH或1N HCl调至所需的值? 培养基配成固体时，应加入0.6~1.0％的琼脂如配置液体培养基，则不需加入琼脂? pH值调整好后直接分装，，高压湿热灭菌，1.05kg/cm2， 120℃，15-20min灭菌? 培养基常温放置几天确保无菌后，再使用 ??材料的接种外植体：组培过程中所使用的材料称为外植体－Explant 消毒－－采用理化方法杀灭微生物的方法。外植体的消毒：必须经过表面消毒将微生物杀死后才能接种。 否则造成污染。先将材料用自来水洗净，在75%的酒精 中浸30秒钟左右，转入5－15%的次氯酸钠中浸泡5－10 分钟，最后用消毒后的蒸馏水洗涤材料3－5次。? 消毒后的材料，根据需要，用灭过菌的器械将其分离或切 割，然后接入到培养基中。 激素的类型作用：使外植体产生愈伤组织或启动分裂??生长素类（Auxins）：NAA（萘乙酸）、2,4-D（2,4-二氯 苯氧乙酸）、IAA（吲哚乙酸）、IBA（吲哚丁酸）等 细胞分裂素（CTK）：常用的是6-BA（6-苄基腺嘌呤）、KT（激动素）、ZT（玉米素）等?赤霉素：较少应用，促进试管苗的生长。细菌过滤器消毒： 经过一层微孔滤膜（0.22~0.45 μm)。 微生物不能通过滤膜。用于酶液和激素的消毒。 激素的比例? 生长素/细胞分裂素对形态分化极其重要比例高时有利于生根----生根培养基比例低时有利于芽的分化----生芽培养基比例处于平衡时有利于愈伤组织的生长----基本培养基 因物种不同，激素的绝对比例有所不同。e.g.柑橘2,4-D 1.5 + NAA 1.0