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大鼠牙周炎模型的建立 牙龈炎是牙齿缺损的主要原因，它严重威胁着人类的健康。关于牙周炎的有效治疗方法，目前还不是一个难题。关于牙周炎模型的研究,国内外均有报道,但都存在不同的缺陷。我们在挖掘祖国医学,应用中药治疗牙周炎的研究中,通过局部钢丝结扎结合全身应用糖皮质激素,成功地建立了牙周炎动物模型,现报告如下。 1 材料和方法 1.1 临床中心提供 选用160～200 g Wistar 大鼠20 只(兰州大学医学实验中心提供),雌雄各半,合格证号:医动字14-006。采用随机区组按性别各分为2 组:对照组和实验组。 1.2 注射部位及频率 对照组每只大鼠在全麻清醒后于后肢股二头肌肌注生理盐水(山东康宁药业有限公司,生产批号1 ml/kg,1 次/2 d 共7 次,然后1 次/3 d,共2 次,共计9 次;实验组在全麻下用直径0.2 mm的正畸钢丝结扎左上颌第二磨牙牙颈部,同时肌注醋酸泼尼松龙(浙江仙琚制药股份有限公司,批号:060302)5 mg/kg(1 ml/kg),注射部位、频率及次数同对照组。所有动物于实验第6 周和第8 周分2 批处死。 1.3 左下颌第二牙槽骨吸收 ①大体观察:大鼠活动能力、被毛、食欲及粪便情况;②口腔肉眼观察:牙龈及牙周袋情况;③X线检查:观察左上颌第二磨牙近远中牙槽骨吸收情况;④组织学观察:将左上颌骨用40 g/L多聚甲醛固定、100 g/L EDTA脱钙、石蜡包埋,颊腭向制作厚5 μm的切片,HE染色。 2 结果 2.1 注射次数对大鼠一般情况的影响 实验组大鼠在注射激素第4 天后出现拱背卷曲、少动倦怠、被毛疏松、无光泽、进食下降、大便干燥等症状,随着注射次数的增加,上述症状日益明显,大鼠无一死亡;对照组大鼠表现正常(图 1)。 2.2 嘴唇型牙的产生 实验组大鼠在实验后第4 天,左上颌第二磨牙牙龈组织出现红肿,1 周后牙龈肿胀暗红,触及易出血,以后牙周袋形成、加深,龈组织糜烂溢脓。对照组口腔牙周组织无异常。 2.3 x线检查 实验组左上颌第二磨牙近远中牙槽骨嵴吸收,根间暗影明显,严重的吸收已达根中1/2;而对照组表现正常(图 2)。 2.4 牙槽骨的形态 实验组牙间乳头沟内上皮溃疡、坏死,牙周袋形成,牙周膜炎症明显,牙周膜纤维排列紊乱,牙槽嵴吸收明显,表面呈蚕食状,牙槽骨呈骨质疏松状态,可见明显的破骨细胞和骨吸收陷窝。对照组牙龈上皮和上皮下结缔组织无病理性改变,牙周膜纤维排列整齐,牙槽骨表面光滑,没有破骨细胞和骨吸收陷窝形成(图 3、4)。 3 讨论 3.1 动物及模型的确定 牙周病是口腔常见病,其复杂的致病因子、发病机制及某些防治措施等常无法直接在人体上进行研究,因此动物实验成为牙周病研究的基本实验方法之一。易感牙周炎的动物种属较多,一般可选用大鼠、金黄地鼠、犬、猪、猴等为造模动物。其中犬、猴的牙周解剖、组织结构、微生物及免疫学等都与人类有极其相似之处,所以常作为牙周炎的研究模型。但由于这几类动物价格昂贵,饲养及实验条件要求高,所以难以具体实施研究。大鼠齿式为I1/1,M3/3,通常在出生后5 周所有磨牙完全萌出,除切牙牙根持续生长外,其牙周组织如牙龈、牙槽骨、牙周膜的解剖结构及相互关系与人相似;其口腔菌斑的形成及其生长发育、滋生、繁殖等亦都与人类相似,且由于大鼠价格便宜、操作简便,所以在牙周炎的实验研究中,大鼠是一种较好的模型动物。 3.2 牙周炎模型的制备方法 人类牙周炎是以牙菌斑为始动因子的多因素疾病,菌斑诱发早期的炎症过程,而口腔卫生差、牙合创伤等局部因素及内分泌障碍、免疫状态、遗传因素等全身因素影响着牙周炎的发生发展。菌斑和宿主的反应共同作用导致了牙周炎的破坏过程。据报道实验性牙周炎动物模型的建立有很多方法、有单纯局部结扎法、接种致病菌法、饲以高糖黏性食料法、多种方法联合应用等。单纯局部结扎法操作简单,早期骨吸收明显,但随着时间延长,伴有骨的重新形成,骨丧失反而减少,此模型适用于短期研究。接种致病菌法、饲以高糖黏性食料法、多种方法联合应用同样只强调了局部因素在造模中的作用,而忽视了全身因素,因此这些模型作为人类牙周炎的动物模型都不理想。但若只强调全身因素的作用,动物模型也不理想。罗云纲等在用Wistar大白鼠造模实验中发现激素组牙龈乳头炎症较轻,牙周膜、牙槽骨未见明显变化。因此,实验性牙周炎模型必须具备上述2 个因素,一是促使口腔局部菌斑堆积,二是降低宿主防御能力。 目前有关牙周炎模型的报道较多,且基本上都强调了上述2 方面的作用,但在具体造模的方法上均有一定的不足。史凤芹等在造大鼠牙周炎模型时,醋酸泼尼松龙用法为肌注1.25 mg/(只·d),共8 d,存在着激素给药量大,用药连续,大鼠死亡率高的缺点。周秀青等肌注醋酸泼尼松龙5 mg/kg,每3 d 1 次,共