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姜辣素抗小鼠胃溃疡作用及其机制研究 溃疡是一种慢性溃疡，发生在门户和幽门之间。这是一种常见的临床疾病，通常是罕见的。据统计，约11%的人一生中患有疾病。此病若不能及时对症治疗很容易发生穿孔、出血、梗阻以及胃溃疡癌变,给患者身心带来极大痛苦。现代用来控制胃溃疡的方法主要是使用质子泵抑制剂和组胺H2受体阻滞剂来抑制胃酸分泌,但从长期的临床治疗上来看有很多不利影响和复发的报告。生药姜具有开胃止呕,化痰止咳,发汗解表的性能,姜辣素是生药姜中一些具有辣味物质的总称。其主要成分为6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚。本文作者应用了现代药理学研究手段,通过考察姜辣素对幽门结扎法致胃溃疡模型和阿司匹林致胃溃疡模型的作用,初步探讨其作用机制。 1 实验仪器与试剂 SX721分光光度计(山东高密彩虹分析仪器有限公司),J2-HS型低温超速离心机(美国BECKMAN公司),JC-1200γ放射免疫计数器(中国科技大学科技实业总公司中家光电仪器分公司),RE-2000A型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂),微型植物试样粉碎机(北京市永光明医疗仪器厂),202-2AB型电热恒温干燥箱(天津市泰斯特仪器有限公司),KH-250B型超声清洗器(昆山禾创超声仪器厂)。 姜辣素(由沈阳药科大学中药学院提供),体内实验时,用体积分数为40%的聚乙二醇400(polyethyleneglycol 400,PEG400)溶液配制,米索前列醇(misoprostol,MPS,湖北葛店人福药业有限责任公司,批号:081207),酚酞(天津市博迪化工有限公司,批号,氢氧化钠(沈阳市正信高科技研究所试剂部,批号,阿利新兰8GX(美国Amresco公司),柠檬酸(沈阳正信高科技研究所试剂部,批号,磷酸氢二钠(广东汕头市西陇化工厂,批号:0503071),6-keto-PGF1α放免试剂盒(中国人民解放军总医院科技开发中心,批号:200908),消炎痛EDTA·Na2(中国人民解放军总医院科技开发中心)。 昆明种小鼠,体质量25～30 g,雌雄各半,由沈阳药科大学实验动物中心提供,质量一级合格,实验动物生产许可证号:SCXK(辽)2003-008。 2 方法 2.1 姜辣素的制备 2.1.1 超声辅助提取 取鲜生姜若干置于干燥箱中于60 ℃干燥至恒质量,用粉碎机粉碎过0.3 mm筛,粉碎过的样品置于烧杯中,以体积分数为60%的乙醇溶液为溶剂,质量浓度80 g·L-1条件下超声处理15 min,布氏漏斗抽滤,取滤液,低压浓缩回收乙醇,得姜辣素粗提物。 2.1.2 洗脱溶液浓缩 处理好的大孔吸附树脂,用量为m(姜辣素粗提物)∶m(干树脂)=4∶100,洗脱溶剂为V(正己烷)∶m(乙醇)=7∶3,洗脱速度:0.4 mL·min-1,将洗脱得到的洗脱液浓缩,得姜辣素。 经分析姜辣素的纯度质量分数为63.44%,姜辣素的主要成分为6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚、姜酮及姜烯酚。其中,6-姜酚约占53%,8-姜酚约占13%,10-姜酚约占30%,姜酮和姜烯酚低于1%。 2.2 抗幽门扎法对大鼠胃不好 2.2.1 小鼠胃损伤指数gk-1、姜辣素检测 昆明种小鼠60只,体质量25～30 g,雌雄各半,随机分为6组,即溶剂对照组和模型组(灌胃给予体积分数为40%的PEG400溶液)、米索前列醇组(0.14 mg·kg-1)、姜辣素低剂量组(73 mg·kg-1)、姜辣素中剂量组(145 mg·kg-1)、姜辣素高剂量组(290 mg·kg-1)。每天灌胃给药1次,连续7 d,第六天给药后禁食24 h,自由饮水。末次给药1 h后,除溶剂对照组外,其他各组小鼠乙醚浅麻醉,行幽门结扎术。术后20 h处死小鼠,取出全胃,观察胃黏膜损伤情况,并计算各组小鼠胃损伤指数及溃疡抑制率。判定标准:点状溃疡(直径小于1 mm的溃疡),3个点计1分;长条状出血溃疡(直径大于1 mm的溃疡),宽度在1 mm之内者则按长度计分每1 mm长计1分,如宽度大于1 mm者按长度加倍计分。溃疡抑制率(%)=(模型组溃疡指数-给药组溃疡指数)/模型组溃疡指数×100%。 2.2.2 保肝活性氧测定 昆明种小鼠50只,体质量25～30 g,雌雄各半,随机分为5组,即模型组(灌胃给予体积分数为40%的PEG400溶液)、米索前列醇组(0.14 mg·kg-1)、姜辣素低剂量组(73 mg·kg-1)、姜辣素中剂量组(145 mg·kg-1)、姜辣素高剂量组(290 mg·kg-1)。小鼠每天灌胃给药1次,连续7 d,第六天给药后禁食24 h,自由饮水。末次给药1 h后,各组小鼠乙醚浅麻醉,剖开腹壁,行幽门结扎术。手术20 h后结扎贲门,处死小鼠,取出全胃,将胃液倒入试管中,离心10