缺钼胁迫对烟草光合气体交换和叶绿素荧光参数和叶绿体超微结构的影响.docxVIP

缺钼胁迫对烟草光合气体交换和叶绿素荧光参数和叶绿体超微结构的影响 关于叶绿体细胞超微结构的显微观察 由于植物生物量的积累，植物代谢能力的强度可以从植物光谱参数、毛竹光束参数和植物绿色体的超微结构等方面反映出来。光合性能参数是光合作用强弱的最直接反映, 叶绿素荧光参数则反映植物叶片光系统Ⅱ对光能的吸收、传递和耗散等状况, 传递出叶片在胁迫环境下对光能利用的微观信息, 而对叶片叶绿体细胞超微结构的显微观察, 更有助于从解剖学角度阐明植株的光合生理微观机制。 钼素是植株体的必需营养元素之一, 植物缺钼的外观特征之一是脉间失绿, 叶片扭曲变形。示踪元素研究表明, 叶绿素减少的区位多发生在缺钼的同一脉间区内, 而叶绿素含量直接影响植株对光能的吸收和利用程度, 因此钼素与光合作用的关系密切。柳勇等研究表明, 施钼冬小麦较强的抗寒力与其稳定的细胞膜结构密切相关。目前, 有关钼营养或其与多种营养元素配施对油菜、苦瓜、烤烟等作物生长的报道也较多, 但研究大多集中在对作物的增产、增质效果上, 而有关植株光合系统参数和叶绿体超微结构对钼胁迫的报道鲜见。鉴于烟草是一种对钼有奢侈吸收性的典型模式作物, 因此, 本文采用水培方法, 研究缺钼胁迫对烟苗的光合色素、光合气体交换参数和叶绿素荧光动力学参数的影响, 并从细胞学角度深入探索叶绿体超微结构对缺钼胁迫的响应, 以揭示烟草响应缺钼胁迫的光合生理机制。 1 材料和方法 1.1 营养液配制与分析方法 试验于2013年在安徽农业大学实践基地大棚进行。供试材料为茄科烟草属 (Nicotiana tabacum) 烤烟品种“南江三号”, 选取生长一致的健壮小苗, 按株距30 cm移栽至不透明塑料盆中, 盆上加盖厚泡沫固定烟苗, 并防止营养液中微量元素含量受到污染。盆下角设置开关阀门, 以减轻更换营养液时对根系的伤害。营养液配制参考Hoagland配方并进行调整, 每1 L培养液中含硫酸镁0.168 g, 磷酸二氢钾0.414 g, 硝酸钾0.384 g, 氯化钾2.50×10-3g, 硼酸2.86×10-3g, 硫酸锌4.60×10-4g, 硫酸铜8.00×10-5g, 氯化锰8.00×10-5g, 硝酸钙0.463 g, 硫酸铁0.004 g。所用试剂为分析纯。整个试验过程用水均为去离子水。 1.2 测试方法 1.2.1 烟苗的水培和培养 采用不加钼素的营养液为缺钼胁迫处理, 根据预试验结果, 以钼质量比0.20 mg/kg的完全营养液处理作为对照。每处理12株, 3次重复。移栽前, 用无水乙醇对容器和所用工具进行浸泡消毒, 然后用去离子水冲洗干净。将烟苗根部基质洗净, 经去离子水浸泡8 h后, 分别同时进行水培40 d。先用1/10正常浓度的缺钼和施钼处理营养液预培养5 d, 之后用1/4正常浓度的营养液预培养5 d, 最后用2种处理的正常浓度营养液进行培养。培养初期, 营养液每5 d更换1次, 15 d后每天更换营养液, 用正常浓度的营养液培养烟苗30 d。采用2种处理的正常浓度营养液培养时记为0 d, 分别在培养0、10、20、30 d时进行取样和测定。试验于2013年6月5日进行培养, 7月15日采样测定结束。移栽时, 取根部浸泡后的烟苗进行钼素含量测定, 烟苗中钼质量比0.03 mg/kg。 1.2.2 叶位标记测定 采用王学奎的方法测定总叶绿素和类胡萝卜素含量。采用美国LI-COR公司生产的LI-6400型便携式光合测定系统在晴天上午9:00~11:00进行, 每处理重复3次, 对待测叶片进行叶位标记, 测定叶片净光合速率、胞间CO2浓度、气孔导度和蒸腾速率。 1.2.3 高水势梯度中叶片活体测定 采用便携式脉冲调制叶绿素荧光仪 (IMAGING-PAM.2001型, 德国WALZ) , 每处理取3株, 在每片标定叶位上取4点进行活体测定, 尽量使叶片上的具体取样位置保持一致, 水培在大棚室内进行, 烟株对光线的接受程度略有差异。每次测定均在无月晚上19:00进行。先对待测叶片暗处理20 min, 打开测量光, 并打开光化光, 适应20 s后打开饱和脉冲光。PSⅡ初始荧光、最大光化学效率、光合电子传递速率、光合有效量子产量和非光化学猝灭系数等参数均由荧光成像系统在选定模式下自动计算生成。 1.2.4 抽气固定、装复 分别在培养10 d和30 d时, 取缺钼和施钼处理烟苗的倒二叶完整叶片, 洗净后揩干, 用双面刀片取1 mm×2 mm的叶肉小块, 迅速投入到2.5%戊二醛固定液中进行抽气, 固定。整个操作在4℃下进行。丙酮梯度脱水, 环氧树脂包埋, Power-Tome-XL型超薄切片机制成超薄切片后染色, 于日立H-7650型透射电镜观察并拍照。 1.3 数据的统计分析 数据采用Excel 200