用差速离心法制备油菜种子微粒体及微粒体蛋白浓度测定.docxVIP

用差速离心法制备油菜种子微粒体及微粒体蛋白浓度测定 油菜是中国的重要油食动物之一。含油量和脂肪酸的组成是关系到油味素质量优良的重要指标之一。由于多不饱和脂肪酸如亚油酸(18∶2)、亚麻酸(18∶3)等易氧化的缺点,人们希望提高油菜单不饱和酸如油酸(18∶1)的含量。在亚油酸和亚麻酸的合成过程中,内质网Δ12-脂肪酸去饱和酶(FAD2酶)的活性尤为重要,因为它负责向位于内质网的单不饱和脂肪酸中引入第2个双键,是多不饱和脂肪酸合成的第一步也是关键的一步。它存在于内质网膜上,微粒体是在制备真核细胞匀浆时形成的囊泡微粒,由破碎的内质网形成。因此,油菜种子微粒体的制备是对油酸脱氢酶进行深入研究的前提。目前,微粒体的研究范围多集中于哺乳动物(人、大鼠和小鼠),油菜种子微粒体制备方法的研究尚未见报道。笔者采用差速离心法制备油菜种子微粒体,并对其蛋白浓度进行检测,以期为油菜种子油酸脱氢酶的深入研究奠定基础。 1 材料和方法 1.1 高油酸油酸盐系表面活性剂 油菜种子于2009年10月在湖南农业大学油料作物研究所科研基地进行播种,于2010年4月对高油酸、低油酸2个品系进行人工授粉,挂牌标记,在授粉后47 d进行取样。取样时快速剪下角果,置于50 ml带塞离心管中,马上投入液氮罐,带回实验室后迅速置于-70 ℃超低温冰箱保存。 1.2 仪器、试剂和试药 AR2140电子分析天平(OHAUS,USA