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香附炮制前后挥发性成分对比研究 香附是莎草科植物的一种干燥的生根。它具有平肝解郁、理气宽中、调经止痛的功效，被历代医家称为“气病同治部和女统计部”。《本草纲目》认为香附“生用则上行胸膈、外达皮肤……醋浸炒则消积聚”, 即香附醋制后可增强其散瘀止痛、疏肝行气的功效。现代化学研究结果显示, 香附醋制后其α-香附酮、总黄酮、木犀草素、微量元素等的量均有所变化, 但此类报道大多评价指标单一, 或检测样本量较少, 不足以表征中药炮制前后成分的差异变化, 难以体现中药复杂成分的整体性和普遍性。在课题组前期确定的香附醋制工艺的基础上, 基于中医药整体观, 采用GC-MS技术, 研究香附生品、参照品、醋制品的GC-MS挥发油指纹图谱, 拟从整体的角度表征香附挥发油醋制前后化学信息的变化, 为揭示香附醋制机制及其物质基础奠定基础。 1 仪器、试剂和仪器 7890A/5975C型气相色谱-质谱联用仪 (安捷伦) ;DZF—6051真空干燥箱 (成都一恒科技有限公司) ;TSTP—2500电热恒温培养箱 (成都特思特仪器有限公司) ;Esun—0086电热套 (四川成都培养箱制造有限公司) ;Mettler Toledo分析电子天平 (Mettler Toledo分析仪器有限公司) ;挥发油提取器 (成都亚荣有限公司) ;乙醚为重蒸后的分析纯, 无水硫酸钠等试剂均为分析纯;10批香附药材来源见表1。 2 方法和结果 2.1 香附样品 2.1.1 生物 2.1.2 u3000湿、湿、湿、长 称取香附净药材2 000 g, 加入800 m L水, 拌匀后放入25℃电热恒温培养箱中恒温闷润6 h, 于 (140±5) ℃翻炒至干燥。取10批生品制成相对应的10批参照品。 2.1.3 醋-水制备栽培 称取香附净药材2 000 g, 加入800 m L醋水溶液 (醋-水比例5∶3) , 拌匀后放入25℃电热恒温培养箱中恒温闷润6 h, 于 (140±5) ℃翻炒至干燥。取10批生品制成相对应的10批醋制品。 2.2 含生药材10/l的储备液的配制 参照《中国药典》2010年版一部附录挥发油测定法, 提取各组香附挥发油。精密称取香附生品、参照品、醋制品粉末 (过60目筛) 100.0 g, 置于圆底烧瓶中, 加入900 m L水, 浸泡2 h后加热并保持微沸状态10 h。用乙醚萃取上层液体, 萃取液定容至10 m L, 即配制成质量浓度为含生药材10g/m L的储备液。加入活化过的无水氯化钙干燥。精密量取1 m L储备液置于10 m L量瓶中, 用乙醚稀释, 定容, 取稀释液适量, 过0.22μm微孔滤膜, 即得。 2.3 扫描量m 色谱柱为Agilent 19091S-433柱 (30 m×250μm, 0.25μm) ;载气为高纯氦气, 柱内载气流量为1.0 m L/min。升温程序:80℃ (保持2 min) , 再以5℃/min升至120℃ (保持5 min) , 以1℃/min升至125℃ (保持10 min) , 以0.5℃/min升至128℃ (保持10 min) , 然后以0.5℃/min升至145℃ (保持10 min) , 再以20℃/min升至250℃ (保持2 min) , 最后以5℃/min升至280℃ (保持5 min) 。进样量1μL, 分流比为20∶1, 体积流量为0.8 m L/min, 容积延迟2 min;EI电离源, 接口温度为280℃, 电子能量70 e V, 离子源温度230℃;扫描质量范围m/z 50~500;质谱检索标准库:NIST MS searc h 2.0。 2.4 方法研究 2.4.1 仪器精密度试验 取同一批香附生品, 按“2.2”项下方法制备供试品溶液, 连续进样6次, 按照“2.3”项下方法测定, 选择10个主要峰进行比较, 结果表明, 各峰相对保留时间RSD0.09%, 相对峰面积RSD0.43%, 结果表明仪器精密度良好。 2.4.2 方法的重现性测定 取同一批香附生品, 按“2.2”项下方法平行制备6份供试品溶液, 按照“2.3”项下方法测定, 选择10个主要峰进行比较, 结果表明, 各峰相对保留时间的RSD0.12%, 相对峰面积RSD1.37%, 结果表明该方法重现性良好。 2.4.3 溶液稳定性试验 取同一份供试品溶液, 分别于0、3、6、9、12、24 h按照“2.3”项下方法测定, 选择10个主要峰进行比较, 结果表明, 各峰相对保留时间的RSD0.09%, 相对峰面积RSD1.41%, 结果表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。 2.5 指状图谱分析 2.5.1 相似度评价系统的构建 将10批香附生品 (SC1~SC10) , 参照品 (SW1~SW10) 和醋制品 (SV1~SV