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黄芪多糖的提取及分离纯化研究 中药黄是豆科植物膜中黄鼠尾和蒙古黄鼠尾的干燥根。具有益中、调阳、固外、托毒、舒肌、利尿、止泻的功效。主要理学成分为茶多酚、糖苷、黄酮、各种氨基酸和微量元素。 黄芪多糖是黄芪的有效成分之一, 是从黄芪根中得到的一类大分子活性物质。 现代药理学研究表明, 黄芪多糖具有抗衰老、 抗过氧化、 增强免疫功能、 改善心血管功能、 抗肿瘤等作用, 能增加机体的非特异性抵抗能力, 临床常用作免疫增强剂。 临床上多用水直接煎煮法提取黄芪多糖, 但收率和纯度均较低, 为了更好地开发和利用黄芪多糖, 对其提取和纯化工艺进行了进一步的研究。 1 材料和方法 1.1 仪器、试剂和仪器 壳聚糖 (青岛海得贝生物工程有限公司) , Ⅱ型ZTC1+1天然澄清剂 (天津正天成澄清技术有限公司) , UV2102 PCS紫外分光光度计 (尤尼柯上海仪器有限公司) , AUW220D电子分析天平 (日本岛津公司) , DZF-2型真空干燥箱 (北京市光明医疗仪器厂) , 所用试剂均为分析纯。 黄芪药材 (购于河南省药材公司) , 经河南中医学院董诚明教授鉴定, 为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao的干燥根。 1.2 提取医疗用品的方法 1.2.1 黄芪多糖的提取 取黄芪药材800g, 分别加12倍、10倍水煎煮2次, 抽滤, 合并2次滤液, 减压浓缩至800mL, 从中取出200mL加适量95%乙醇, 使最终含醇量为80%, 过夜, 抽滤, 沉淀依次用丙酮、无水乙醇洗涤, 得黄芪多糖粗品。 1.2.2 黄芪多糖的提取 取黄芪药材400g, 分别加12倍、10倍量用NaOH调pH为12的碱水煎煮2次, 抽滤, 合并2次滤液, 调pH值为中性, 减压浓缩至400mL, 从中取出200mL加适量95%乙醇使最终含醇量为80%, 过夜, 抽滤, 沉淀依次用丙酮、无水乙醇洗涤, 得黄芪多糖粗品。 1.2.3 黄芪多糖的提取 取黄芪药材200g, 分别加12倍、10倍量用CaO调pH为12的碱水煎煮2次, 抽滤, 合并2次滤液, 调pH值为中性, 减压浓缩至200mL, 然后加适量95%乙醇, 使最终含醇量为80%, 过夜, 抽滤, 沉淀依次用丙酮、无水乙醇洗涤, 得黄芪多糖粗品。 1.2.4 黄芪多糖的提取 取黄芪药材200g, 分别加12倍、10倍量用NaOH调pH为12的含5%乙醇的碱醇回流提取2次, 抽滤, 合并2次滤液, 调pH值为中性, 减压浓缩至200mL, 然后加适量95%乙醇, 使最终含醇量为80%, 过夜, 抽滤, 沉淀依次用丙酮、无水乙醇洗涤, 得黄芪多糖粗品。 1.2.5 黄芪多糖的提取 取黄芪药材200g, 分别加12倍、10倍量用CaO调pH为12的含5%乙醇的碱醇回流提取2次, 抽滤, 合并2次滤液, 调pH值为中性, 减压浓缩至200mL, 然后加适量95%乙醇, 使最终含醇量为80%, 过夜, 抽滤, 沉淀依次用丙酮、无水乙醇洗涤, 得黄芪多糖粗品。 1.3 纯度方法 1.3.1 皮聚糖悬浮剂的制备 称取1g壳聚糖, 用100mL 1%的醋酸水溶液加热搅拌进行溶解, 即得100mL 1%的壳聚糖絮凝剂。 1.3.2 1天然清算剂zec1 A组分:用蒸馏水配成体积分数1%的溶液50mL;B组分:用1%的乙酸配成体积分数1%的溶液50mL。 1.3.3 黄芪多糖的纯化 取200mL水提得到的黄芪多糖溶液, 用NaOH调pH到10.54, 静置过夜, 抽滤除去沉淀, 同时把下层滤液用10%硫酸调pH值为5.44, 静置过夜, 过滤, 加适量95%乙醇, 使最终含醇量达到80%, 静置过夜, 抽滤, 沉淀依次用丙酮、无水乙醇洗涤, 得初步纯化后的黄芪多糖。 1.3.4 壳聚糖絮凝后黄芪多糖的制备 取200mL水提得到的黄芪多糖溶液, 按黄芪多糖浓缩液体积的20%加入壳聚糖絮凝剂, 搅拌20min后静置40min, 抽滤得到滤液, 然后加适量95%乙醇, 使最终含醇量为80%, 过夜, 抽滤, 沉淀依次用丙酮、无水乙醇洗涤, 减压干燥得到壳聚糖絮凝除杂后的黄芪多糖。 1.3.5 提取多糖、干燥多糖 将壳聚糖絮凝除杂后的黄芪多糖80℃水浴2h后, 先加入B组分, 每30min搅拌1次, 2h后加入A组分, 1h后搅拌1次, 2h取出, 离心10min (3000r/min) , 上清液加适量95%乙醇, 使含醇量达到80%, 静置过夜, 沉淀用丙酮、无水乙醇洗涤数次, 减压干燥得到多糖。 1.4 黄棕榈糖含量 1.4.1 葡萄糖溶液的制备 精密称取干燥至恒定质量的葡萄糖标准品0.10007g, 定溶于1000mL容量瓶中