植物生理学实验(1).pptxVIP

第三次实验;植物组织水势的测定;2、材料：甘薯、使君子等（叶片）（自选）;4、实验步骤 对照组（原溶液） 8 支试管，编号（1-8 ），分别配制0.1～0.8 mol/L 蔗糖溶液各10 ml。 试验组（处理液） 8 支指形管，编号（1-8 ），对号吸取对照组蔗糖溶液 2 ml 叶片打孔取样→叶圆片10 枚/处理 →平衡 30 min（摇动 1 次/5 min） →加入甲烯蓝粉末少许，摇匀→用毛细管吸取染色液→于相同编号对照组液层中央→缓慢放出液滴→观察小液流的流动方向→记录结果→确定与组织水势相等的蔗糖溶液浓度（C） → 计算组织水势;注意事项：;第四次试验;实验原理;甲烯蓝吸附法实验原理;实验材料与方法;实验步骤;计算公式;测定根系吸收面积记录表;第五次试验;硝酸还原酶活性测定;4、步骤;注意事项：;3、处理 ① 0.1 mol/L 磷酸缓冲液（pH=7.5）5 ml + 蒸馏水 5 ml ② 0.1 mol/L 磷酸缓冲液（pH=7.5）5 ml + 0.2 mol/L KNO3 5 ml 4、实验步骤 材料 0.3～0.4 g + 处理液→三角瓶→抽气 5 min → 30℃，酶促反应 30 min →反应液 1 ml → 30℃，显色 30 min → 测定OD520 5、标准曲线的制作 NaNO2浓度梯度设为：0、0.5、1、2、3、4、5 μg/mL。 取各标准液 1 ml 于试管中→加磺胺试剂 2 ml ，摇匀→ 加α-萘胺试剂 2 ml，摇匀→ 30℃，显色 30 min → 测定OD520 6、作业 计算材料由KNO3 （NO3-）诱导产生的硝酸还原酶的活性（NO2-： μg · h-1· g-1 FW） （分子量NO2-/NaNO2=46/69=2/3）;生命科学学院 龙云;第六次试验;一、层析用叶绿体色素的提取及色素分离 1、原理 叶绿体色素各组分的脂溶性和分子量不同，可用层析法于有机溶剂中分离。 2、色素提取 新鲜菠菜叶 → 去中脉 → 剪碎 → 烘干 → 研磨成叶粉 → 丙酮提取 特点：该提取液不含水分，色素提取较完全，层析效果较好。;3、分离（纸层析法） 用毛细管在层析纸上点样2-3次 → 于层析瓶中加入CCl4约10 ml +少量无水Na2SO4 → 层析纸悬挂于层析瓶中 → 层析（至层析剂接近层析纸前沿） 注意事项： ①层析纸勿接触层析瓶内壁，以防止色素带向瓶壁扩散； ②层析瓶不要水洗，否则有拖带现象或拖带更严重。 4、作业 将层析结果（层析纸）贴在实验报告中，并标出各色素带的名称。;二、叶绿体色素的提取及理化性质的鉴定;3、叶绿体色素理化性质的鉴定与结果分析（p.54- 55） ①叶绿素荧光现象观察：取提取液（2 ml）于一支试管中，比较在入射光和反射光下颜色的差异，并解释之。 ②光对叶绿素的破坏作用：2 支试管盛取提取液少许（0.5 ～1 ml）分别置于强光和黑暗下，实验结束时，观察其颜色的变化，并解释之。 ③铜代反应：取提取液少许（1 ml）于一支试管内，逐滴加入浓 HCl至提取液变成褐色，然后加入 CuAC2（醋酸铜）晶体少许，并于酒精灯上加热， 再观察颜色变化，并解释之。;4、黄色素与绿色素的分离 在色素丙酮提取液中加入碱（30% KOH甲醇溶液），使叶绿素（本身是一种双羧酸的酯）与碱发生皂化反应，产生的盐能溶于水。加入水相后，黄色素与皂化叶绿素分别溶解于上层有机相和下层无机相，从而分离开来。 具体操作按《指导》p.55 步骤 “4” 进行。 5、色素溶液的吸收光谱观察 用分光镜按《指导》p.55 步骤 “5” 进行，并列表指出各色素溶液的吸收光谱，据此总结两类色素的吸收光谱。 注意：分光镜调好后，不要挪动，以免重调。 6、作业 除了对上述观察到的现象进行解释和回答有关问题外，还请回答 p.56 “实验作业” 1，2问题。;Absorption spectrum;红;蓝;???绿素的提取;铜代叶绿素反应;生命科学学院 龙云;实验六 叶绿体色素的提取、分离及其理化性质的鉴定;二、叶绿体色素的提取及理化性质的鉴定;4、黄色素与绿色素的分离 在色素丙酮提取液中加入碱（30% KOH甲醇溶液），使叶绿素（本身是一种双羧酸的酯）与碱发生皂化反应，产生的盐能溶于水。加入水相后，黄色素与皂化叶绿素分别溶解于上层有机相和下层无机相，从而分离开来。 具体操作按《指导》p.55 步骤 “4” 进行。 5、色素溶液的吸收光谱观察 用分光镜按《指导》p.55 步骤 “5” 进行，并列表指出各色素溶液的吸收光谱，据此总结两类色素的吸收光谱。 注意：分光镜调好后，不要挪动，以免重调。 6、作业 除了对上述观察到的现象进行解释和回答有关问题外，还请回答 p.64 “实验作业” 1，2问题。