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反刍家畜小肠消化率测定方法的比较 反刍动物的养分消化主要从肿瘤胃和结肠开始。国内外对瘤胃发酵进行了大量的研究, 对反刍家畜小肠消化率的测定方法国外报道较多, 国内研究较为少见。综合国内外的研究结果来看, 反刍家畜小肠消化率的测定方法常见的有体内法、小尼龙袋法、实验动物模拟法及体外法。 1 型瘘管饲料营养成分测定 体内法是一种直接测定消化率的古典方法。原理是通过分析进入真胃或十二指肠的营养成分与粪或回肠末端食糜中饲料未消化成分之差来估算营养物质的表观消化率, 真消化率是在此基础上用内源成分损失校正。在有十二脂肠过桥瘘管的情况下, 可以全收集食糜 (Zinn等, 1980) 而不用标记物, 但在只有“T”型瘘管时, 必须使用标记物 (Orskov, 1969) 。 粪或回肠末端食糜组成的分析与十二指肠相似。粪中采样会高估饲料中营养成分的小肠消化率。回肠末端采样更具有科学性, 但由于试验方法成本较高, 试验动物的成活率也低, 因此仅限于个别试验采用。 混合日粮中营养成分消化率测定比较简单, 而单个饲料的测定比较复杂。常用的方法有纯化日粮法、半纯化日粮法和真胃灌注法。 真胃灌注法产生于80年代。该方法最初用于计算瘤胃未降解蛋白质 (UDP) 的消化率, Hvelplund等 (1987) 用此方法测定了豆粕、棉籽饼、菜籽饼、向日葵饼、鱼粉和椰子饼奶牛瘤胃培养16 h残渣的消化率, 得出各饲料间单个氨基酸消化率存在有显著性差异, 从而证实测定单个饲料UDP消化率的必要性。 体内法测定的消化率存在着很大的误差, 日粮的频繁更换对动物来说是一种应激, 同时标记物的回收率往往低于100%, 且不同的处理方法获得的标记物回收率不同, 另外食糜或粪采样的代表性及化学成分不同引起的误差也在所难免。 2 小鼠体内法和微生物n对udp消化率的影响 Johnson等 (1944) 首次用小鼠来预测微生物蛋白质的消化率, 随后许多研究者重复了这次试验。用小鼠预测UDP的消化率开始较晚, 不论是微生物N还是UDP利用小鼠获得的试验数据均低于反刍动物体内法获得的结果。原因是反刍家畜与单胃动物在消化能力上存在着很大差异, 另外, 试验小鼠日粮蛋白质水平 (Johnosn, 1944) 及小鼠性别和年龄 (McNaught等, 1954) 上的差异也可能是小鼠模拟数据偏低的原因。 3 小尼龙袋法测定小尼龙袋干草经酶活性的方法 此法又叫运动尼龙袋法 (mobiled nylon bag teehuique) , 最初用于猪消化率的测定。Krikpatrick和Kennelly (1984) 首次将它用于生长母牛UDP肠消化率的测定。这种方法是将一定量的饲料 (瘤胃降解残渣) 封闭在一定大小的小尼龙袋内, 按规定方法塞入真胃瘘管或十二指肠瘘管内, 然后从粪中收集小尼龙袋, 通过分析小尼龙袋内营养成分残留来计算消化率。由于该法具有良好的重复性 (de Boer等, 1987) 和与体内法数据的强烈相关 (Hvelplund, 1985) , 很快受到人们的重视。该种方法测得的消化率是全肠道的消化率。部分研究者试图从回盲处 (回盲瘘管术) 收集运动尼龙袋, 这样可测出小肠的消化率, 但从回盲处收集小尼龙袋较困难, 并容易发生堵塞, 因此绝大多数报道材料是全肠道的消化率数据。Frydrych (1992) 利用这种方法测定了各种能量饲料、蛋白质饲料、新鲜牧草、青贮饲料和干草经瘤胃培养16 h后饲料残渣在肠内的消化率, 并对它们进行比较, 发现重复性较高, 而且与前人数据存在有良好的相关。 如何获得瘤胃非降解残渣是小尼龙袋法测定肠消化率的关键, 根据已有的报道材料看出, 多数在瘤胃内培养十多个小时。 饲料样品量/尼龙袋表面积的大小影响瘤胃内饲料降解率, 进而会影响肠消化率。Nocek (1985) 比较了四种不同比例 (2.5、12.6、25.3、37.9 mg/cm2) 情况下豆饼蛋白质消化率, 结果表明12.6 mg/cm2条件下测定值近似于体内值。按此标准, 小尼龙袋内装0.5 g左右饲料为好。但由于0.5 g饲料量太少, 给化学分析带来困难。为了解决这一矛盾, Frydrych (1992) 提出:饲料样品放在大尼龙袋内 (6 cm×12 cm) 内培养 16 h, 将获得的残渣取少许 (0.5 g粗料或1 g精料) 放入小尼龙袋内测UDP的肠消化率。Antoniewicz等 (1992) 用此法测得30种饲料DM和CP消化率的重复性很好。 Varrikko和Vannatalo (1990) 综合考虑了小尼龙袋空白部分相对表面积与网孔大小对饲料肠消化率的影响。装有1.1 g精料或0.8 g粗料的小尼龙袋空白部分相对表面积 (%) :网孔大小 (μm) 为2∶1, 2