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测定败酱草片的质量控制标准 慢性盆腔炎是指女性内殖器及其周边地区的结扎和腔膜炎症的总称。大多数部位同时发生炎症，有些部位不受限制。其患病率高, 病程迁延, 缠绵难愈。败酱草片为治疗慢性盆腔炎的妇科首选用药之一, 由败酱草、白芍、甘草等10味成分中药组成, 组方治则新颖, 不同于市场上同类的清热解毒之法。方中白芍为主要药物之一, 有效成分芍药苷化学性质稳定。我们采用高效液相色谱法测定白芍中芍药苷的含量, 有效地控制了白芍的投料, 保证了产品的质量。 仪器和试剂 1 仪器、试剂和仪器 AL型电子分析天平 (梅特勒-托利多仪器 (上海) 有限公司) ;微量进样器 (上海科学仪器厂) ;岛津LC-10AT型高效液相色谱仪 (岛津, Kyoto, 日本) 、SPD-10A紫外检测器 (岛津, Kyoto, 日本) ;AT-130型柱温箱 (天津奥特赛斯) 、Waters色谱柱;N2000色谱工作站 (浙江大学) ; HH-S型数显恒温水浴锅 (江苏金坛医疗仪器厂) 。 2 友生物化学成分2-氧代丁酸氧基甲基 芍药苷 (110736) :中国药品生物制品检定所。甲醇 (色谱纯) :天津市四友生物医学技术有限公司。醋酸、异丙醇、醋酸、磷酸二氢钾:均为化学纯, 由上海振兴化工一厂提供。败酱草片 (0.45g/片) 与阴性对照品:均由合肥神鹿双鹤药业有限公司提供。 方法和结果 1 试验溶液与对照溶液的制备 1.1 聚酰胺柱的制备 取本品3片, 研细, 精密称定, 精密加入乙醇25ml, 称定重量, 超声提取30min, 放冷至室温, 再称定重量, 加乙醇补足减失的重量, 摇匀, 静置, 滤过, 精密量取续滤液20ml, 置水浴上蒸干, 残渣加水5ml使溶解, 滤过, 滤液加于已处理好的聚酰胺柱上加水50ml洗脱, 收集洗脱液, 移入50ml容量瓶中, 加水稀释至刻度, 密塞, 摇匀, 即得。 1.2 阴性对照溶液的制备 按处方组成除去白芍, 其余药味按制剂工艺要求, 制成不含白芍的败酱草片, 按供试品溶液制备项下的方法, 制备阴性对照溶液。 1.3 对照溶液的制备 精密称取以五氧化二磷干燥至恒重的芍药苷对照品, 加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液, 密塞, 摇匀, 即得。 2 检测条件及检测波长 色谱柱:Waters C18 (250mm×4.6mm) ;流动相:参照文献, 但比例做了调整, 结果以甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-醋酸-异丙醇 (67:173:4:4) 较为理想;检测波长:230nm;柱温:25℃;流速:1.0ml/min。检测波长选择参照文献, 在190～350nm波长范围内进行光谱扫描, 结果芍药苷在230nm处有最大特征吸收, 因此选择230nm为检测波长。 3 相关组分的分离度 分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液注入液相色谱仪, 记录色谱图。结果表明, 芍药苷与其他组分能达到基线分离, 理论塔板数按芍药苷峰计算≥2000 (N=3978) ;分离度1.5 (R=4.3215) 。实验表明, 供试品中芍药苷保留时间与对照品一致, 且阴性对照品无干扰。 4 标准曲线的准备和线性范围的研究 4.1 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品5.59mg, 置50ml容量瓶中, 加甲醇适量振摇使溶解, 再加甲醇稀释至刻度, 密塞, 摇匀, 即得芍药苷对照品溶液。分别吸取芍药苷对照品溶液0.2、0.5、1.0、2.0、3.0、5.0、10.0ml, 置10ml容量瓶中, 加甲醇稀释至刻度, 密塞, 摇匀, 即得。 4.2 标准曲线的绘制 分别精密吸取上述溶液各20μl, 按上述色谱条件依法测定峰面积积分值, 以峰面积积分值A为纵坐标, 芍药苷浓度c (μg/ml) 为横坐标, 绘制标准曲线。实验数据经直线回归得回归方程:A=74298C-41778, r=0.9999 (n=7) 。试验表明, 芍药苷对照品溶液为2.236～111.8μg/ml时与峰面积积分值, 具有良好的线性关系。 5 峰面积积分测定 精密吸取供试品溶液, 按上述色谱条件下, 重复进样5次, 每次20μl, 依法测定峰面积积分值, 结果见表1。结果表明, 精密度试验RSD为0.10%, 本法精密度良好。 6 测定添加不同种类工艺中的麻黄苷含量 取同一批号的样品5份, 精密吸取样品液各20μl, 注入液相色谱仪, 依法测定供试品中芍药苷的含量, 记录芍药苷峰面积, 结果见表2。结果表明:重现性试验RSD为2.28%, 本法重现性良好。 7 布氏色谱分析 取供试品溶液, 分别于0、1、3、6、12、18、24h内, 按上述色谱条件下, 分别进样20μl, 记录芍药苷峰面积, 结果见表3。结果表明:稳定性试验RSD为0.23%, 样品在24h内稳定