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牙周膜功能状态与牙槽骨改建的关系 畸形牙齿的移动是一个过程，需要导致牙周组织的不断重建，最终表现为牙槽骨的重建，牙周膜是这一系列过程的主要执行者。本实验目的是研究异常功能状态牙周膜对正畸牙槽骨改建的影响。 材料和方法 1. 动物及适应性饲养 健康成年雄性SD大鼠48 只(华中科技大学同济医学院实验动物中心提供) ,6～8 周龄,体重(250±20) g。适应性喂养1 周后进行实验。大鼠随机分为两大组:正常对照组(C组)16只和实验组32只。 2. 动物模型的准确性 实验组32只雄性SD大鼠腹腔麻醉下拔除右下颌(C区)全部磨牙,致其右上颌(A区)磨牙丧失对颌牙而无咬合接触;而左侧上下颌磨牙(B区和D区)所受咬合力代偿性增大。拔牙3周后形成A区磨牙牙周膜废用性萎缩和B区磨牙牙周膜代偿性机能亢进动物模型。已做预实验确定动物模型的准确性。据此又将实验组分为废用组(A组)、代偿组(B组)两个亚组,每组16只动物。 3. 下颌第一牙间 大鼠经20%乌拉坦溶液(1 g/kg) 腹腔注射麻醉后仰卧固定,将一根长5 mm NiTi拉簧用直径0.25 mm正畸结扎钢丝固定于上颌第一磨牙与同侧切牙间(A组与C组为右上颌第一磨牙,B组为左上颌第一磨牙),初始力值为60 g(电子称测定) ,使第一磨牙近中移动,见图1。上颌中切牙与结扎丝间以光固化树脂加固,防止脱落。实验过程中严密监控大鼠的加力装置,若有损坏和脱落,及时修理安装。 4. trap染色 三组分别于加力0 d、3 d、7 d各处死动物2只,14 d处死其余动物。取带有加力侧上颌第一磨牙及周围牙槽骨的组织块,放入10%福尔马林溶液(pH 7.4)4 ℃固定24 h , 10% EDTA(pH 7.4)脱钙4～6周,梯度乙醇,正丁醇脱水透明,浸蜡,常规石蜡包埋。将标本按平行牙长轴方向做近远中向连续组织切片,片厚5 μm。每个标本选取可见到上颌第一磨牙近中根管贯穿整个近中根的3张组织切片行TRAP染色,电子显微镜下观察并对近中根压力侧牙槽骨表面的破骨细胞记数。另取2张行HE染色对照观察。TRAP染色方法:将4 mg的萘酚AS-BI磷酸酯酶(美国,Sigma)溶于0.25 ml N、N -二甲基甲酰胺中(阴性对照组不加萘酚AS-BI磷酸酯酶),加入0.2 mol/L醋酸缓冲液25 ml (pH 5.0),再加入 35 mg的对品红染剂(美国,Sigma)和60 ul 10%氯化镁,液体过滤后加热至37 ℃,加50 mmol/L酒石酸。将切片浸入以上配制好的液体中孵育,37 ℃,2 h ,之后流水冲洗30 min,苏木素复染7 min,冲洗,脱水,封片,镜下观察并计数(EM×40)。TRAP染色阳性的多核巨细胞(核多于3个)位于锯齿状边缘的破骨陷窝内或牙槽骨表面,将记数结果求均值。 5. x线片的拍摄方法 取加力14 d后的实验组与对照组大鼠上颌组织块,在拆除加力装置前通过RVG(Radio Video Graph 可视化X线投照系统)拍摄并测量上颌第一与第二磨牙间间隙宽度以确定牙齿移动距离(见图2)。 方法:将组织块颊舌向水平放置于X线摄影台上,照相时使X线垂直进入标本,保持每次照相时标本、X线球管及胶片三者间关系恒定,以确保拍摄结果的可靠性与可比性。本研究X线片均由一名有经验技师严格按照投照标准拍摄。每张X线片重复测量3次,取平均值。 结果 1. 组间的显著性差异 SPSS10.0统计软件ANOVA方差分析(P0.01),三组间有显著性差异。选择Bonferroni法进行组间两两比较,B组与A组、C组间有显著性差异(P0.01),A组、C组组间无显著性差异(P0.05)。 2. 组破骨细胞数的方差分析 未加力时牙周膜废用性萎缩组(A组)、牙周膜机能代偿性增强组(B组)和对照组(C组)近中压力侧牙槽骨表面破骨细胞计数分别为0.33、0.20及0.16,方差分析三组间无显著性差异(P0.05);加力3 d后3组破骨细胞数均显著升高,分别为3.83、5.33及5.67;7 d时分别为1.67、3.20及3.67;14 d时分别为1.16、2.83及3.33,方差分析三组间均有显著性差异(P0.05)。选择Student-Newmen-Keuls法进行组间两两比较,3 d、7 d、14 d时A组与B组、C组间有显著性差异(P0.05),B组、C组间无显著性差异(P0.05)。 牙周组织的结构与组织结构 正畸牙齿的移动是牙周组织进行不断改建的过程, 受到全身和局部诸多因素的调控。牙周的改建, 最终表现为牙槽骨的改建, 而牙周膜是这一系列过程的主要执行者,其中成纤维细胞、成牙骨质细胞、成骨细胞以及大量的未分化间叶细胞是唯一可产生牙骨质、牙槽骨的细胞群。改变牙周膜功能状态是否会影响牙槽骨的改建?本实验观察到加