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益肾护骨方对sd大鼠尿酸、股骨生物力学及胫骨组织形态计量学指标的影响 废用性骨质疏松症属于复发性骨质疏松症。本病可因运动功能受限或障碍所致,也可因神经、肌肉、骨骼系统损伤或术后长期制动所引起。废用性骨质疏松症给患者带来诸多麻烦,如疼痛、易发病理性骨折、肢体功能障碍等一系列并发症。本病已引起医学工作者们的广泛关注,国内外学者在探讨本病病因、发病机理和防治措施方面做了大量的深入的研究。然而对于益肾活血中药对废用性骨质疏松动物模型的血尿生化、骨组织形态学、生物力学的影响这一最重要的研究目前鲜见。本实验研究不同剂量益肾护骨方对废用性骨质疏松动物模型骨组织的血尿生化、股骨生物力学及胫骨骨组织形态计量学指标的影响,本研究为临床治疗废用性骨质疏松和学科交叉研究益肾活血中药防治废用性骨质疏松提供新思路。 1 材料和方法 1.1 动物分组、温度设定 3月龄SD大鼠70只,雌雄不限,由江苏大学实验动物中心提供。动物合格证:SCXK(苏2009-0002),发证机关是江苏省实验动物管理委员会。动物分组后置于温度23 ℃～26 ℃,相对湿度55%～70%,自然光照、隔音的动物室内,动物自由饮水、进食。大鼠喂食标准混合饲料。 1.2 特效药 1.2.1 益肾护骨处方和剂量 鹿角片10 g,补骨脂10 g,骨碎补10 g,淮牛膝15 g,熟地15 g,当归15 g,白芍15 g,川芎10 g。 1.2.2 含骨碎补总黄酮有效成分 购买自北京岐黄制药有限公司,每粒胶囊0.25 g,含骨碎补总黄酮有效成分0.18 g。使用时加蒸馏水制成一定浓度溶液,2.5 g/100 mL,给大鼠灌胃给药。 1.3 各组大鼠坐骨神经切断术组的分组 动物实验室适应性喂养1周,再按照体重排序后,按随机数字表分别将大鼠分为7组,即A组-正常对照组、B组-假手术组、C组-模型组、D1组-益肾护骨方高剂量组(相当于成人剂量的20倍)、D2组-益肾护骨方中剂量组(相当于成人剂量的10倍)、D3组-益肾护骨方低剂量组(相当于成人剂量的6.25倍)、E组-阳性药物强骨胶囊对照组,每组10只。C组、D1组、D2组、D3组、E组行右后肢坐骨神经切断术,B组的手术过程只分离显露坐骨神经后缝合切口。A组只作参照饲养。 1.4 带骨神经的传统消毒 大鼠用10%水合氯醛以3 mL/100 g行腹腔麻醉后,剔除右侧臀部、大腿部及尾部近段的毛,再将大鼠俯卧位固定于事先制作的手术台上,以碘伏消毒剃毛区,铺巾,定位髋关节后侧,切口沿大腿纵轴方向长约2 cm,切口皮肤及皮下筋膜,暴露股二头肌,切断二头肌暴露坐骨神经,于近髋处用锐利刀片切除坐骨神经,长约5 mm,并将神经断端打结处理以预防断端包块的形成,逐层缝合切口。肌注庆大霉素0.1 mL,以预防感染。每天用酒精棉球和碘酒擦拭伤口,直至伤口愈合。 1.5 组不同造模后重新灌胃 造模后第2天分别予以药物干预,灌胃给药4周,每日1次,给药情况如下: A组:正常饲料喂养,自由饮水。 B组:正常饲料喂养,自由饮水。 C组:造模后第2天予以药物组同体积的生理盐水灌胃。 D1组:造模后第2天予以益肾护骨方52 g/kg体重灌胃。 D2组:造模后第2天予以益肾护骨方26 g/kg体重灌胃。 D3组:造模后第2天予以益肾护骨方16.25 g/kg体重灌胃。 E组:造模后第2天予以强骨胶囊0.25 g/kg体重灌胃。 以上各组灌胃液体量为10 mL/kg体重,其浓度及等效剂量按体重折算。 1.6 测试指标 1.6.1 酸酶及免疫酶联法 使用全自动生化分析仪测定尿肌酐(Cr)、血碱性磷酸酶(ALP)指标,尿羟脯氨酸(HOP)用对二甲氨苯甲醛法测定,血清骨钙素(BGP)用放射免疫法测定,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP )用免疫酶联法。 1.6.2 材料点弯曲实验 取出股骨标本,生理盐水冲洗干净,自凝树脂将样本两端固定于统一包埋深度。将样本固定于实验夹上,进行三点弯曲实验。在BOSE3510万能材料实验机上,在变形率为2 mm/min恒定作用下对股骨标本施加载荷,股骨标本中点上方有一个压杆。记录股骨断裂过程中力与位移曲线。 1.6.3 远侧干端骨组织形态检测 取各组右胫骨近侧三分之一段,10%中性甲醛固定24～48 h,10%中性EDTA液4℃～8℃脱钙,冠状对剖,70%、80%、90%酒精顺浓度梯度脱水,组织浸蜡,石蜡包埋,5 μm切片,HE染色和Masson染色,镜下观察股骨远侧干骺端骨组织形态改变。光学显微镜下观察,取10×10倍下骨骺线下缘一视野,测节点数和游离末端数。 1.7 数据处理和分析 统计分析采用SPSS 11.5软件包,所有数据行正态分布检验,呈正态分布数据以均数±标准差(ˉx±s)(xˉ±s)表示。多组间比较采用单因素方差分析,组间相互比较采用LSD分析,两组