神经生长因子、被动运动对失神经大鼠股骨生物力学性能的影响.docxVIP

神经生长因子、被动运动对失神经大鼠股骨生物力学性能的影响 神经疾病引起的瘫痪，如髓质伤后的下肢麻痹、中风引起的瘫痪或轻度麻痹，以及严重的神经损伤后的长期卧床。由于神经支配丧失，骨瘦如素腐败的发生率很高，局部四肢失去了神经支配和运动能力。没有特定的治疗效果。开展防治失神经所致废用性骨质疏松的研究,有助于减少并发症,如病理性骨折、肾结石、关节周围软组织骨化、肢体畸形等。本实验采用大鼠失神经方法形成废用性骨质疏松的动物模型,大鼠骨失神经支配后,主要表现为失神经支配和失运动能力两个方面,本研究采用外源性神经生长因子和被动运动干预,通过检测大鼠骨生物力学性能的变化,探讨其对大鼠失神经所致废用性骨质疏松的防治作用。 1 研究对象和方法 1.1 动物及适应性饲养 实验动物(购于河南大学实验动物中心)为3月龄健康雄性SD大鼠50只,体重265.80±14.65 g,清洁级,在动物房中适应性喂养一周。标准啮齿类动物饲料喂养,自由饮食。 1.2 实验方法和过程 (1)实验材料。 注射用鼠神经生长因子冻干粉(NGF,规格:20μg/支,每支含4500AU),武汉海特生物制药股份有限公司生产。骨钙素试剂盒(BGP)和抗酒石酸酸性磷酸酶试剂盒(TRACP)购自南京建成生物工程研究所。 (2)实验分组。 将50只健康SD大鼠随机分成A、B两组,A组10只为假手术组(SHAM组),B组40只为造模组,造模组大鼠行神经切除术。造模成功后,将B组40只大鼠随机分成4组:去神经对照组(DN组);神经生长因子组(NGF组);被动运动组(PM组);神经生长因子加被动运动组(NGF+PM组)。每组10只,各组内依次编号并用不同颜色记号笔区分。 (3)造模方法。 大鼠腹腔注射3%戊巴比妥钠(25mg/kg)溶液麻醉,无菌条件下先于俯卧位行右后肢股外侧切口,于股骨粗隆水平切断坐骨神经,切除坐骨神经5-6mm,用生理盐水冲洗并缝合切口;再置大鼠于仰卧位,正中纵切口,于腹股韧带水平切断大鼠右侧股神经,切除股神经5-6mm并生理盐水冲洗、缝合切口,缝合后切口消毒。A组进行同法操作,但不切断神经。术后均给予庆大霉素切口外涂。 (4)治疗方法。 治疗于神经切除术后第4天进行,NGF组和NGF+PM组于手术侧腓肠肌处按每公斤体重2个活性单位注射NGF,每天上午注射1次。其余组注射生理盐水,各组大鼠隔日称体重一次,并按体重变化给药。PM组和NGF+PM组于注射30分钟后进行被动运动。实验时间为30天。 (5)被动运动方法。 将大鼠置于自制的网夹内,拉出右后肢,抓住趾部,与脊柱呈45°向后外方牵拉,直至右后肢完全伸直(膝关节、踝关节均伸直),然后再与牵拉方向相反,将右后肢推向身体,使之完全屈曲紧贴身体(膝关节完全屈曲,踝关节完全背屈),这样往复运动为1次,每天被动运动训练300次。 (6)取材。 实验30天后,各组在安静状态下称重。所有动物均以股动脉放血处死,每组大鼠剥取右侧股骨,剔除软组织,用浸透生理盐水的纱布包好,-20℃冰箱保存备用。 (7)股骨生物力学测试。 将股骨置于Instron万能材料试验机(美国Instron Co生产,型号:4302)上作三点弯曲实验,加载速度为2mm/min,跨距为24mm,记录其载荷-变形曲线和应力-应变曲线获得。 (8)数据处理。 全部数据处理由SPSS12.0软件系统完成,采用珚X±D表示。数据组间比较采用单因素方差分析(Oneway-ANOVA),组间差异采用LSD检验,显著性水平为α=0.05。 2 结果 2.1 其它去神经组 手术后前两天各组大鼠体重下降,进食减少,三天后各组大鼠体重开始增长,但DN组大鼠增长与其它组相比生长速度延缓,毛色光泽下降,有稀疏了蓬松感,活动力下降,神情倦怠。其他各去神经组手术后也有类似状况,但随着对其实施各种干预手段,毛色有所改善,活力增加,被动运动效果表现最好,大鼠体征与SHAM组类似,身体增长也较快。手术10天左右极个别大鼠出现自食现象,发现后剔出这些异常大鼠。各组大鼠实验期间生长发育情况基本正常。 2.2 dn和sham、pm、根张力量当事人间的差异,相关性研究组成 (1)股骨结构力学参数的比较 见表2,在股骨最大载荷方面,DN和NGF组与SHAM组相比差异均具高度显著性(P0.01),PM组与SHAM差异具显著性(P0.05),NGF+PM组与SHAM组差异不具有显著性(P0.05);SHAM、PM和NGF+PM与DN组间差异均具高度显著性(P0.01),NGF组与DN组间差异具显著性(P0.05)。 在股骨断裂载荷方面,与SHAM组相比DN组与之的差异具高度显著性(P0.01),其他组与之无显著性差异(P0.05)。与DN组相比,SHAM、PM和NGF+PM与DN组间差异均具高度显著性(P0.01)N