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银杏叶提取物egb61对后路固定大鼠腓肠肌na 0 骨骼肌失用性血压病的防治 四肢固定是关节疾病的主要治疗方法。骨骼肌肉失用性收缩，严重影响了疾病的治疗和功能恢复。在某些情况下，其有害程度超过原发病，骨肉失用性收缩是患者恢复四肢功能的严重障碍。如何有效的防治骨骼肌失用性萎缩已尤为重要。本实验旨在观察银杏叶提取物(extract of ginkgo biloba,EGB761)对大鼠后肢固定后腓肠肌Na+-K+-ATP酶及Ca2+-ATP酶活性的影响,探讨其对骨骼肌失用性萎缩的防治作用。 1 小鼠肌肉中pahs活性检测 设计:随机对照动物实验。 单位:解放军第一八七中心医院骨科。 材料:实验于2005-04/2006-03在广州南方医院创伤骨科实验室(广东省重点实验室)完成。雄性SD大鼠24只,体质量200~260 g,由南方医科大学实验动物中心提供,随机数字表法分为空白组、对照组、实验组,每组8只。 主要试剂及仪器:银杏叶提取物EGB761(浙江康恩贝制药股份有限公司);ATP酶测试盒(南京建成生物工程研究所)。 设计、实施、评估者:实验设计为第一、二作者,干预实施为第一、四作者,评估为第二、三作者。经过正规培训,采用盲法评估。 方法: 动物模型制备:空白组在笼内自由活动,对照组及实验组大鼠按照Jozsa等的方法,将大鼠右后肢用可塑性石膏由足跖管型固定至膝上1 cm处,膝关节固定于屈曲位100°,踝关节固定于跖屈60°,以便小腿的肌肉保持于松弛位,共4周。每天检查固定情况,随时进行调整。石膏浸液掺入苦味酸,以防大鼠啃咬。对照组给予蒸馏水3 mL/d灌胃,实验组给予银杏叶提取物EGB761水溶液灌胃(灌胃剂量120 mg/(kg·d),浓度14 g/L)。 取材:4周后,20 g/L戊巴比妥钠腹腔内注射麻醉大鼠,切取右后肢腓肠肌,去除腱膜、肌腱和神经,进行酶活性检测。 Na+-K+-ATP酶及Ca2+-ATP酶活性的测定:Na+-K+-ATP酶及Ca2+-ATP酶活性的检测程序按照ATP酶测试盒说明书提供的方法进行。先将每份肌肉标本分别称质量,肌肉∶水按1∶9(m/V)的比例在每份标本中加入生理盐水,将肌肉剪碎,在玻璃匀浆管中制成10%的匀浆,3 000 r/min离心10 min,取上清0.2 mL加入0.8 mL生理盐水稀释成2%的匀浆。匀浆中加入酶促反应的相应试剂,混匀后,4 000 r/min离心10 min,取上清200μL定磷。加入定磷试剂后混匀,37℃水浴30 min,冷却至室温,在分光光度计660 nm处(1 cm光径,蒸馏水调零)比色,读数。与标准无机磷酸成色进行比较,酶活性以无机磷(pi)μkat/g表示。 主要观察指标:腓肠肌Na+-K+-ATP酶及Ca2+-ATP酶活性。 统计学分析:由第一作者采用SPSS 10.0软件通过one-way ANOVA法完成统计处理,实验结果用x±s表示,各组间两两比较用LSD法。 2 结果 2.1 动物的数量分析 2.2 两组小鼠na+-k+-atp酶及ca2+-atp酶活性对比 与空白组相比,对照组和实验组腓肠肌Na+-K+-ATP酶及Ca2+-ATP酶活性显著下降(P0.05)。与对照组相比,实验组Na+-K+-ATP酶及Ca2+-ATP酶活性显著高于对照组(P0.05)。以上结果表明,大鼠肢体固定后腓肠肌的Na+-K+-ATP酶及Ca2+-ATP酶活性明显下降,但是给予银杏叶提取物EGB761处理的大鼠,腓肠肌酶活性下降程度明显低于未经处理的大鼠,说明银杏叶提取物EGB761能够抑制失用性萎缩,腓肠肌酶活性的下降。 3 银杏叶提取物对失用性骨骼肌缩的防护作用 失用性肌萎缩是临床上一种常见的并发症。在临床上,许多疾病(如瘫痪)或治疗措施(如骨折固定等)常常伴有神经肌肉电活动减少和(或)肌肉去负荷。在“失用”状态下,骨骼肌发生明显的萎缩,骨骼肌萎缩在形态上表现为肌肉质量和体积减少,肌纤维直径或横截面积缩小,Ⅰ型肌纤维向Ⅱ型肌纤维转化以及肌肉超微结构的改变。另外,肌肉的收缩特性和生化代谢也都发生了相应的改变,从而引起肌肉收缩能力和耐力的下降。肌肉萎缩对于肌力、运动、耐力以及日常生活都会产生较大的影响。因此对肌萎缩的预防和治疗就显得尤为重要。 长期以来,国内外许多学者对失用性肌萎缩的发生机制和防治进行了广泛而深入的研究,提出了许多学说或假说,有神经营养障碍学说、神经冲动减退学说、氧化应激学说等。同时失用状态下,肌梭的传入放电减少,细胞凋亡等因素以及骨骼肌胰岛素样生长因子1的表达情况均参与了骨骼肌细胞萎缩的过程。导致骨骼肌萎缩的原因很多,到目前来说还没有完全阐明。预防及治疗方面,中高强度耐力训练、被动运动、电刺激、药物治疗等,这些都从一定程度上抑制了骨骼肌萎缩的发生。近年来