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草本葡萄酒多糖含量的测定 乙醇沉淀-苯酚硫酸法
1 范围
本文件规定了乙醇沉淀-苯酚硫酸法测定草本葡萄酒多糖含量的分析方法。
本文件适用于草本葡萄酒中多糖含量的测定。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本
文件,凡是不注日期的引用文件,其最新版本 (包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 (ISO 3696:1987,MOD)
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 原理
利用低温条件下多糖在乙醇溶液中聚合形成微颗粒沉淀,再在硫酸的作用下先水解成单糖,并
迅速脱水生成糖醛衍生物,然后与苯酚生成橙黄色化合物,用分光光度法于 490 nm 波长处测定期多
糖含量。
5 试剂
本方法所用试剂为分析纯,水为 GB/T 6682 规定的三级水。
5.1 浓硫酸。
5.2 葡萄糖标准溶液 (0.1 g/L):
准确称取 105 ℃干燥恒重的D-无水葡萄糖 0.1 g (精确到 0.000 1 g),加蒸馏水溶解,并定容至 1
000 mL。
5.3 苯酚溶液:
苯酚使用重蒸苯酚,称取重蒸苯酚 10g,加蒸馏水溶解,并定容至 150ml,随后保存于棕色瓶中备用。
6 测定步骤
6.1 标准曲线的绘制:
准确吸取 0.1 g/L 葡萄糖标准溶液 0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL 分置于 25 mL
具塞试管中,各试管中添加蒸馏水至2.0mL,再添加 1.0mL 苯酚溶液,迅速加入 5.0mL 浓硫酸,摇匀后放置
5 min, 置于 100 ℃ 水浴中加热 15 min,取出冷却至室温;另以水 2 mL 加苯酚和浓硫酸,同上操作为空
白对照,于 490 nm 处测定吸光度,绘制标准曲线。
6.2 样品处理及测定:
分别取 25 mL 草本葡萄酒于 50 mL 瓷坩埚中在 60 ℃ 下挥发至近干,10 mL 水溶解转移至 50 mL
离心管中加入 40 mL 无水乙醇,混匀后 4 ℃ 沉淀 24 h ,12 000 r/min 离心 10 min,除去上清液,
保留沉淀,随后加入等体积 80% 乙醇溶液 12 000 r/min 离心 5 min,去离子水溶解后定容至 25 mL
待测。
准确吸取适量样品溶液,按标准曲线绘制的方法测定吸光度,根据标准曲线计算出吸取的待测液
中葡萄糖的浓度。
7. 测定结果的计算
7.1 计算公式:
样品中多糖含量根据下式计算:
× 1
草本葡萄酒多糖含量 (mg /L)= × 0.9
2
式中:M ——根据标准曲线计算得样品测定液的葡萄糖含量,单位为 mg/L;
V1 ——样品定容体积,单位为毫升 (mL);
V2——比色测定时所移取样品测定液的体积,单位为毫升 (mL);
0.9——葡萄糖换算成葡聚糖得校正系数。
计算结果保留至小数点后两位。
7.2 重复性:
每个试样取三个平行样进行测定,以其算术平均值为测定结果,在重复条件下三次独立测定结果的绝
对差值不应超过算术平均值的 10 %。
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