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锰、镉单独及联合染毒对高等植物的生理生态毒性效应 锰（mn）毒性是我国南方酸性土壤限制作物产量的重要因素。广西锰矿储有量、开采量居全国首位,产生了大量锰矿废弃地。研究表明,Mn、Cd作为锰矿区土壤的主要污染因子,其复合污染普遍存在。Mn是动植物生长的必需元素,它不仅是组成酶或辅酶的成分,而且是酶的活化剂,在植物的光合放氧、维持细胞器的正常结构、活化酶活力等方面具有不可替代的作用。但过量的Mn对植物有明显的毒害效应,包括大量活性氧的产生对植株造成氧化损伤并诱发植物缺乏铁、钼。Mn对植物的毒害效应体现在不同的细胞组织及生理生化水平上,不同植物耐受Mn的机制也存在差异性,但大都集中在有机酸的螯合解毒、内部积累、外部排斥及氧化等方面。国内外对锰毒性及植物耐受机制研究进展缓慢,对其植物生理毒性的研究也不多见;对镉与其他重金属的复合污染毒性已有不少研究,但多局限于铅、汞、锌等元素,而对Mn2+-Cd2+复合污染方面尚缺乏全面、系统的研究。为探讨Mn、Cd单独及联合染毒对高等植物的生理生态毒性,在对农作物生长的毒性效应研究基础上,笔者选取豇豆作为研究材料。豇豆(Vigna unguiculata)又名豆角、带豆,属豆科一年生植物,在我国南方种植普遍,多作蔬菜食用。在植物体内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)是最重要的抗氧化酶,正常情况下,这些酶的活力是稳定的;MDA是植株体内膜脂过氧化的最终产物,其含量的高低反映了细胞膜脂质过氧化的程度;叶绿素是植物光合作用的物质基础,光合作用对重金属离子的作用较为敏感。因此,通过考察植物体内SOD、POD和CAT的活力变化及叶绿素和MDA的含量,研究Mn、Cd单独及联合染毒对豇豆生物量和叶片生理指标的影响,为重金属污染的毒理学评价以及锰矿区废弃地的生态恢复提供理论依据。 1 材料和方法 1.1 试验2:30lx 实验材料为双子叶植物豇豆,种子购自江西省丰城市豇豆研究中心。选择饱满、均匀的豇豆种子,用2%NaClO溶液消毒30 min,再用蒸馏水洗净备用。以石英砂作为支持介质,先用2%HNO3溶液浸泡过夜,再用去离子水冲洗数次,风干后用塑料花盆分装(每盒2 kg)。将20粒豇豆种子直接播种于盆内,置于人工气候箱中,在(25±1)℃、9 000～12 000 lx下培养,每天光照14 h。加入改良的50%Hoagland营养液(pH=6.8),待出苗后间苗,每盆保留10株生长整齐的幼苗,当第一片真叶完全展开时进行处理。 用去离子水溶解MnCl2、CdCl2(分析纯)配制成母液。试验以改良的50%Hoagland营养液为稀释液,根据前期试验结果,Mn2+染毒浓度为150、300、450、600、750、900 mg/L;Cd2+染毒浓度为10、20、30、40、50、60 mg/L;联合染毒时,Mn2+、Cd2+的剂量组合分别为150 mg/L Mn2++10 mg/L Cd2+,300 mg/L Mn2++20 mg/L Cd2+,450 mg/L Mn2++30 mg/L Cd2+,600 mg/L Mn2++40 mg/L Cd2+,750 mg/L Mn2++50 mg/L Cd2+,900 mg/L Mn2++60 mg/L Cd2+,各染毒组均设3个平行。另以50%Hoagland营养液设立对照。培养在(25±1)℃、9 000～12 000 lx下进行,每天光照14 h,隔天透灌各处理液。染毒14 d收获植物,测定各处理植物的生长、生理指标。 1.2 测量和分析 1.2.1 根、茎、叶生长测定 将砂培豇豆连根小心取出,轻轻除去根部石英砂,自来水冲洗后用滤纸吸干,将根、茎、叶分开,分别称鲜重;株高和根长用直尺测量;植株在105℃下杀青20 min,在60℃下烘干至恒重,称量。 1.2.2 mda含量测定 叶片膜脂质过氧化水平用丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量代表,用硫代巴比妥酸(TBA)法测定MDA;用乙醇提取法测定叶片光合色素含量。 1.2.3 抗酶活性 用氮蓝四唑光还原法测定SOD活力;愈创木酚法测定POD活力;CAT活力用南京建成生物工程研究所生产的CAT试剂盒测定。 1.3 统计分析 数据处理采用SPSS 12软件进行。测定值均为3次重复的平均值。 2 结果 2.1 cd2+对前施物叶鲜重的影响 表1可见,随着Mn2+、Cd2+单独及联合染毒浓度的增加,豇豆的株高、根长、整株干重及根、茎、叶鲜重等生长指标总体呈下降趋势。其中对叶鲜重的影响最为明显,当Mn2+染毒浓度为900mg/L、Cd2+染毒浓度为60 mg/L、Mn2++Cd2+联合染毒浓度为900mg/L Mn2++60 mg/L Cd2+时,叶鲜重与对照组相比分别降低了76.15