高中生物人教版课件：第二节动物细胞工程第二课时动物细胞融合技术与单克隆抗体.pptx

动物细胞工程动物细胞培养（基础）动物细胞融合技术和单克隆抗体动物体细胞核移植技术和克隆动物1.动物细胞培养的条件2.动物细胞培养的过程3.干细胞培养及应用1.动物细胞融合2.单克隆抗体及其应用 运用植物体细胞杂交技术，可以打破不同种植物的生殖隔离，培育出新的作物类型。那么，有没有技术让不同种动物的体细胞杂交，培育出集不同细胞优势于一身的动物细胞呢？第2章第2节 动物细胞工程第2课时 动物细胞融合技术与单克隆抗体1.阐明动物细胞融合技术的含义。2.说出单克隆抗体的制备过程和应用。 时间成果19世纪30年代观察到肺结核、天花、水痘、麻疹等疾病患者的病理组织中有多核细胞1858年观察到正常组织、发炎组织以及肿瘤组织中的多核细胞现象。1875年第一个观察到脊椎动物（蛙类）的血液细胞发生融合的过程。1876年在无脊椎动物中发现了细胞合并现象。1962年日本学者冈田发现仙台病毒具有触发动物细胞融合的效应。1965年英国科学家证实了灭活的病毒可诱发动物细胞融合1974年华裔加拿大学者高国楠创立了聚乙二醇（PEG）化学融合法。1975年Kohler和Milstein成功地融合了小鼠B-淋巴细胞和骨髓瘤细胞而产生能分泌稳定单克隆抗体的杂交瘤细胞。20世纪80年代发展出了电融合技术(1985年酵母原生质体电融合)动物细胞融合技术的发展历史1.动物细胞融合 动物细胞融合技术指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。1.动物细胞融合诱导原生质体融合物理方法：电融合法、离心法化学方法：聚乙二醇融合法、高Ca2+-高pH融合法原理：细胞膜具有流动性 诱导动物细胞融合物理方法：电融合法化学方法：聚乙二醇（PEG）融合法生物方法：灭活的病毒诱导法 1965年，研究证实了灭活的病毒在适当条件下确实可以诱导动物细胞融合。1.动物细胞融合 1.动物细胞融合细胞融合的过程两亲本细胞的细胞核逐渐融合病毒吸附在细胞表面并使细胞凝集两亲本细胞膜上磷脂和蛋白质重新排布形成通道通道扩大，病毒流入细胞质灭活的病毒诱导细胞融合的过程示意图病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。【灭活】是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但是并不破坏这些病毒的抗原结构。 1.动物细胞融合动物细胞融合结果：形成单核细胞，具有原来两个或多个细胞的遗传信息，可表现出两个或多个亲本的特点。诱导融合后的细胞一定具有双方的遗传信息吗？为什么？不一定，诱导A、B两种细胞融合，融合后可能有A、B未融合细胞及AA、AB、BB等多种细胞，因此细胞融合后需要进行筛选。①突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。②成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。③利用细胞融合技术而发展起来的杂交瘤技术，为制造单克隆抗体开辟了新途径。 意义： 植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理融合前处理诱导融合的方法意义和用途克服远源杂交的障碍，获得杂种植株细胞膜的流动性细胞膜的流动性植物细胞的全能性去除细胞壁后诱导原生质体融合使细胞分散后诱导细胞融合物理（电融合法、离心法）化学（聚乙二醇融合法、高Ca2+-高pH融合法）物理（电融合法）化学（聚乙二醇（PEG）融合法）生物方法：灭活的病毒诱导法制备单克隆抗体1.动物细胞融合 防御呼吸道合胞病毒感染 注射单克隆抗体效果好 抗原 动物体内刺激浆细胞抗体抗原不纯抗体不纯 筛选单一B细胞缺陷：不能无限增殖产生大量抗体缺陷：产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。传统抗体制备方法及缺陷：如何解决这个问题呢？2.单克隆抗体及其应用 如何生产单克隆抗体（产量高、纯度高、特异性强）每个B细胞只分泌一种特异性的抗体要获得既能无限增殖又能产生抗体的细胞。一个极富创造力的方案：1975年，英国科学家米尔斯坦和德国科学家科勒设计实验获得了单克隆抗体。1984年获得诺贝尔生理学或医学奖。2.单克隆抗体及其应用一个B淋巴细胞 B淋巴细胞群 单克隆抗体产生克隆化培养单 克隆 抗体 单克隆抗体的制备过程2.单克隆抗体及其应用注射特定蛋白免疫小鼠培养小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞骨髓瘤细胞多种细胞多种杂交瘤细胞能分泌所需抗体的杂交瘤细胞选择培养基筛选克隆化培养专一抗体检测注射到小鼠腹腔内增殖体外培养单克隆抗体融合 用特定的抗原对小鼠进行免疫，并从该小鼠的脾中得到能产生特定抗体的B淋巴细胞。用特定的选择培养基进行筛选∶在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。单克隆抗体的制备过程 单克隆抗体的制备过程对上述经选择