亚硝酸盐的测定.docxVIP

备课用纸 备 课 用 纸 PAGE PAGE 2 亚硝酸盐的测定 一、目的与要求 1、明确亚硝酸盐的测定与控制成品质量的关系。 2、明确与掌握盐酸萘乙二胺法的基本原理与操作方法。 二、原理 样品经沉淀蛋白质，除去脂肪后，在弱酸条件下硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，生成的重氮化合物，再与盐酸萘乙二胺偶合成稳定的紫红色染料，在 538nm 处有最大的吸收，产生的颜色深浅与亚硝酸根含量成正比， 可以比色测定。反应式如下： 三、试剂与仪器 1、亚铁氰化钾溶液：称取 106g 亚铁氰化钾[K Fe (CN) .3H O]，溶于水 后，并稀释至 1000mL。 4 9 5 2 2、乙酸锌溶液：称取 220g 乙酸锌[Zn(CH C00) ·2H 0]，加 30mL 冰乙 酸溶于水，并稀释至 1000mL。 2 2 2 3、饱和硼砂溶液：称取5g 硼酸钠[Na B0 ·10H 0]，溶于 100mL 热水 中，冷却后备用。 2 7 2 4、0.4％对氨基苯磺酸溶液：称取 0.4g 对氨基苯磺酸，溶于 100mL20％ 的盐酸中，避光保存。 5、0.2％盐酸萘乙二胺溶液：称取 0.2g 盐酸萘乙二胺，溶于 100mL 水中， 避光保存。 6、亚硝酸钠标准溶液：精密称取0.1000g 事先于硅胶干燥器中干燥 24h 的亚硝酸钠，加水溶解移入 500mL 容量瓶中，并稀释至刻度。此溶液每 mL 相当于 200μ g 亚硝酸钠。 7、亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液 5.00mL， 置于 200mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每 mL 相当于 5μ g 亚硝酸钠。 8、研钵。 9、分光光度计。 四、操作方法 1、样品处理：称取5.0g 经绞碎混匀的样品，置于50mL 烧杯中，加 12.5mL 硼砂饱和溶液，搅拌均匀，以 70℃左右的水约 300mL，将样品全部洗入 500mL 容量瓶中，置沸水浴中加热 15min，取出后冷至室温，然后一面转动一面加入 5mL 亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入 5mL 乙酸锌溶液以沉淀蛋白质，加水至刻度，混匀，放置 0.5h，除去上层脂肪，清液用滤纸过滤， 弃去初滤液 30mL，滤液备用。 2、测定 吸取 40mL 上述滤液于 50mL 比色管（容量瓶）中，另吸取 0.00、0．40、0.80、1.00、2.50mL 亚硝酸钠标准使用液(相当于 0、2、4、5、12.5μ g 亚硝酸钠)，分别置于50mL 比色管（容量瓶）中。于标准与样品管中分别加入2mL0.4％对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置 3-5 分钟后各加入 1mL0.2％盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静置 15 分钟，用 2 厘米比色杯，以零管调节零点，于波长 538nm 处测吸光度，绘制标准曲线比较。 五、结果计算 x ? A?1000 m? 40 500 ?1000 式中：X：样品中亚硝酸盐的含量，mg／kg； m：样品质量，g； A：测定用样液中亚硝酸盐的含量，μ g；