香芹酚对心肌缺血再灌注小鼠线粒体损伤的影响.docxVIP

香芹酚对心肌缺血再灌注小鼠线粒体损伤的影响 及时恢复冠状动脉出血是缓解急性缺血性缺血性肌腱损伤的基本措施，但心肌不仅会恢复出血，还会导致血液抑制（i-r），这是重新造林的主要障碍。因此,如何有效地减轻心肌I-R损伤成为治疗急性心梗的最大挑战。心肌I-R损伤机制主要为再灌注早期钙超载及活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)爆发。线粒体是再灌注早期ROS大量生成的主要场所,而过度的ROS又会加重线粒体损伤,最终导致细胞凋亡及心肌梗死。线粒体功能障碍及继发的过度氧化应激与心肌I-R损伤休戚相关。因此,减轻再灌注过程中线粒体损伤是减轻I-R损伤的有效措施。香芹酚(5-异丙基-2-甲基苯酚,carvacrol,CAR)是一种单帖酚,广泛存在于多种天然植物挥发油中。研究证实香芹酚具有较强的抗氧化生物活性。本研究进一步探索CAR在心肌I-R过程中线粒体损伤的作用,以期揭示其心肌保护的初步机制。 1 材料和方法 1.1 材料表面 1.1.1 动物 雄性C57 BL/6小鼠,8～11周龄,体重26～30 g,购自南方医科大学实验动物中心(SCXK2006-0015)。 1.1.2 伊文思蓝和nyltetrazeliummo使用 高纯度CAR(98%)、氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)及伊文思蓝均购自Sigma-Aldrich(St.Louis,MO,USA)公司。透射电子显微镜为PHILIPS CM10(Holland)。 1.2 方法 1.2.1 lad凝结前评估 (1)假手术组(Sham组):小鼠麻醉后,行开胸术,冠状动脉左前降支(LAD)下穿线但不结扎;(2)Vehicle+I-R组(Vehicle组:生理盐水对照组):DMSO(1 000μl/kg)配入0.5 ml saline作为Vehicle溶剂对照,于LAD结扎前15 min经左颈静脉缓慢推注,后行I-R术;(3)CAR+I-R组(CAR组):CAR(60 mg/kg)于LAD结扎前15 min给药,后行I-R术。 1.2.2 调查及控制丝 经腹腔注射甲苯噻嗪(5 mg/kg)及氯胺酮(100 mg/kg)麻醉小鼠,气管插管连接ALC-V8S小动物呼吸机并监测心电图及心率。开胸后,于左心耳下2 mm处,用8.0缝线结扎LAD,心电图示ST段弓背型上台,持续45 min后解除结扎线,心电图示ST段缓慢下移,表明再灌注成功。再灌注2 h后检测心梗面积及线粒体损伤相关指标。 1.2.3 血清蛋白和梗死超早期染色aar 再灌注2 h后,再次开胸,结扎LAD,将2%伊文思蓝0.5 ml经右颈静脉注入体内以确定非缺血区,缺血危险区(area at risk,AAR)被定义为无蓝染区域。将左室标本做横截面1 mm连续5个切片,再用1%氯化三苯基四氮唑染色15 min。白色为梗死区域,而活性心肌则被染成红色。采用Image J software图像软件测定并分析心梗面积(infarct size,IS)。 1.2.4 透射电子显微镜sem观察 再灌注2 h后,开胸取左室心肌组织,冰上快速切成1 mm3小块,迅速置入2.5%戊二醛缓冲液中,4℃固定2 h以上,1%四氧化锇固定液4℃后固定2 h,再以磷酸盐缓冲液(pH 7.2)浸洗,乙醇梯度脱水,包埋处理后,超薄切片,醋酸铀及柠檬酸铅染色后,于透射电子显微镜下观察。应用Image J software对线粒体损伤进行超微形态学评估。 1.3 数据处理及分析 采用SPSS13.0软件分析数据,所有数值均以表示。组间差异采用One-way ANOVA分析,经Bonferroni事后比较法检验。P0.05为差异具有统计学意义。 2 结果 2.1 统计学意义p0.05 与Sham组相比,Vehicle组心梗面积显著增加,差异有统计学意义(P0.05);与Vehicle组相比,CAR(60mg/kg)预处理可显著减少心梗面积,差异有统计学意义(P0.05,图1)。 2.2 体面积增大,部分景观嘴唇消失 I-R后心脏组织中线粒体发生肿胀,表现为线粒体面积增大,部分线粒体脊消失(图2A);与Vehicle组相比,CAR显著降低平均线粒体面积,差异有统计学意义(P0.05,图2B)。 2.3 质微粒数增加 与Sham组相比,I-R损伤导致心脏组织中线粒体基质微粒数增加,差异有统计学意义(P0.05);与Vehicle组相比,CAR预处理显著降低线粒体基质微粒数,差异有统计学意义(P0.05,图3)。 2.4 围脂滴数的增加 与Sham组相比,I-R损伤导致心脏组织中线粒体周围脂滴数增加,差异有统计学意义(P0.05);与Vehicle组相比,CAR预处理可显著降低线粒体