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不同卵授精浓度对体外受精-胚胎移植结局的影响 在人类的自然繁殖过程中，只有几十个精髓才能到达受精子影响的部位。而在体外受精-胚胎移植 (IVF-ET) 技术中, 为了获得理想的受精结果, 每颗卵子周围的精子多达数万条。在保证妊娠率的基础上, 最佳的授精浓度是多少, 各中心的看法不尽相同。现回顾性分析了青海省人民医院生殖中心237个IVF-ET周期, 比较不同授精浓度下卵子的受精率、多精受精率、卵裂率、优质胚胎率及妊娠率等指标, 以寻找最佳的授精浓度和获得最理想的IVF结局。 1 数据和方法 1.1 患者年龄及死亡率 2008年5月～2011年9月在青海省人民医院生殖中心行常规IVF, 精卵共培养18～20 h后观察受精情况的患者共237周期, 其中原发性不孕99周期, 继发性不孕138周期。 1.2 方法和组 1.2.1 阴道取卵与精处理 女方采用长方案或短方案超促排卵, 注射人绒毛膜促性腺激素 (HCG) 5 000～10 000 IU后36 h在B超引导下经阴道取卵。男方取精, Sperm Grad法处理精液备用。卵子培养2～4 h后根据要求调整精子浓度, 微滴法授精, 行常规IVF。 1.2.2 精子浓度510万/卵 根据授精浓度分为3组, A组:精子浓度5～10万/卵, 共71周期;B组:精子浓度2～5万/卵, 共119周期;C组:精子浓度1.5万/卵, 共47周期。 1.2.3 生殖发育情况观察 精卵共培养18～20 h后拆卵并观察受精情况。每隔24 h观察各组受精卵的发育情况, D3挑选形态好的胚胎进行移植或冷冻。移植后第14天查血和尿HCG, 第28天B超检查妊娠囊数及确认胎心。 1.3 统计处理 应用SPSS 11.0统计学软件进行数据分析, 均数的比较采用t检验, 率的比较采用χ2检验,P0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.13 各组患者的一般情况 3组患者的年龄、不孕年限及平均获卵数比较差异均无统计学意义 (P0.05) 。见表1。 2.23 优胚率及优胚率 3组的卵子成熟率、受精率、多精受精率、卵裂率及优胚率比较差异无统计学意义 (P0.05) 。A组的妊娠率和着床率显著低于B、C两组, 差异有统计学意义 (P0.05) 。见表2。 3 理外引物对胚胎率的影响 体外环境下精子获能的条件不理想, 许多精子不能获能或同步获能, 为了弥补这一缺陷, 保证IVF的良好受精率, 就需要数以万计的精子共同协作来完成受精过程。但在体内完成受精只需几十条至几百条精子, 因此降低授精浓度符合正常受精时卵子的周围环境。青海省人民医院生殖中心IVF的授精浓度从最初的5～10万/卵曾下调至2～5万/卵, 现在降至1.5万/卵, 数据显示3组的受精率比较差异无统计学意义, 说明1.5万/卵的授精浓度完全能够满足使卵子受精所需的精子数量, 授精浓度下降并不影响IVF的受精率。 多精受精是IVF中常见的异常受精类型, 通常是由于两条或两条以上精子同时进入卵母细胞所致, 多精受精的胚胎由于染色体异常而不能移植, 从而使可移植胚胎的数量减少。授精精子数量的增多可导致卵细胞皮质颗粒释放延迟, 导致较高频率的多精受精。但黄学锋等认为:多精受精与卵子不熟或过熟、卵子皮质反应异常和透明带功能缺陷及机械损伤有关。获卵数较多的患者, 其卵母细胞的质量参差不齐, 不熟或过熟卵子的比例增高, 导致多精受精率也较高。此次研究中3组的平均获卵数及卵子成熟率比较差异均无统计学意义, 与此相应的是3组多精受精率比较差异也无统计学意义, 证实在精子浓度不过高的条件下, 卵子成熟度与多精受精高度相关。 在IVF中, 超出生理状态几百倍的精子围绕在卵子周围, 一方面精子会和卵子争夺营养物质, 使卵子处于营养欠佳的培养环境中, 影响卵子及胚胎的生长发育;另一方面精子代谢产生的大量活性氧化物 (ROS) 会导致细胞膜流动性降低, 促使DNA碎片形成和胚胎发育停止。因此, 理论上降低授精浓度可提高胚胎质量。但青海省人民医院生殖中心数据提示3组的优质胚胎率比较差异无统计学意义, 认为有以下两个原因:①异常精子比正常精子可产生更多的ROS, 不利于胚胎发育, 而IVF中的精子都是经过优化处理的, 因此对胚胎的不良影响较小;②胚胎的质量取决于卵子的质量, 卵子质量受女方年龄、促排卵方案、卵巢基础状态、体内激素水平等因素影响, 是受精前就已决定了的。此次研究只能通过缩短卵子及胚胎在体外的操作时间、保持体外操作温度等手段来维持其质量, 并不能提高他们的质量。 受精浓度为2～5万/卵、1.5万/卵的妊娠率和着床率显著高于5～10万/卵, 差异有统计学意义 (P0.05) 。有研究认为精子代谢产生的大量ROS会导致透明带硬化, 影响胚胎正常孵出与植入, 并减少胚胎活力、降低胚胎