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腹腔镜子宫内人工授精技术在羊临床中的应用 与腹部手术相比，腹部手术具有手术视野广、出血少、手术切口小、对身体的影响小、疼痛反应轻、术后恢复快等特点。在国外，它已广泛应用于动物的临床诊断、动物育种和胚胎移植，如牛腹腔检测、牛肾激活、人工繁殖、牛褶皱左方方位下校正、子宫扭转的早期诊断、，对马腹痛的辅助诊断、隐形尿道的切除、脾肾韧带和脾胃韧带之间的间隙关闭术等。从狗手中取出隐形的睾，完全切断妊娠和胚胎移植。目前腹腔镜技术在羊的应用范围比较狭窄, 主要集中在繁殖领域的几个方面。 1 方式二:通过微创技术生产卵母细胞 未成熟的卵母细胞是转基因羊产生和早期繁殖的起点。腹腔镜技术能非常可靠地在每个期间回收到可预见数量的卵母细胞, 它比用传统开腹手术进行活体内受精卵和活体内发育成熟的卵母细胞回收有更小的损伤性, 因此, 它可从相同的供体多次回收。而且, 腹腔镜技术不同于在屠宰场收集卵巢内的卵母细胞, 它可以从已知健康的动物活体内获得卵母细胞。由于青春期前的动物能获得大卵泡反应, 应用腹腔镜技术采卵已经表明对某些经济动物的早期繁殖, 特别在转基因动物研究方面有很大的发展潜力。 有人用腹腔镜技术从7个羊供体收集到62个卵母细胞, 这些卵母细胞中有16个发育到16~32细胞阶段, 在体外进行受精后, 通过腹腔镜技术将这些体外受精中的13个胚胎植入6 只Rambouillet受体, 这些受体每个都产出1只健康的羊羔。Baldassatre H等应用腹腔镜技术收集未成熟的卵母细胞, 这些卵母细胞接受受精卵DNA显微注射, 这种技术的妊娠和核转移基因组与用体内卵母细胞或受精卵相比时有相似的比率, 说明通过腹腔镜技术收集的卵母细胞可以成功地应用于转基因工程中。 2 不同途径输注精子 绵羊精液冷冻保存及输精技术的研究已经有30多年的历史了, 由于受多种原因限制, 受胎率一直在40%~50%之间。采用腹腔镜子宫角冷冻精液输精技术, 能使冷冻—解冻的精子直接进入子宫角, 显著提高了情期受胎率。 Moses D等在Argentine Patagonia地区1 824头3~7岁母羊和Santa Cruz Province 地区480头19~20月龄的母羊中进行腹腔镜人工授精。结果表明, 腹腔镜子宫内人工授精能成功地应用在澳大利亚美利奴羊和低生育力地区 (如Santa Cruz Province) 19~20月龄的母羊。Moses D等认为同期发情后不必对发情进行观察即可进行腹腔镜人工授精。石国庆等应用腹腔镜技术进行子宫角深部冷冻精液输精, 情期受胎率为72.73%, 比常规冷冻精液输精的情期受胎率 (55.45%) 高出17.28个百分点。田可川等利用保存20年的美利奴羊冻精腹腔镜技术进行子宫内输精试验, 虽然由于当时冻精技术或保存期间的变化等原因, 使其当时的解冻活力仅为0.1~0.2, 但是通过腹腔镜输精, 其受胎率可以达到40.58%。 羊的人工授精一般有两种途径, 第一种是经阴道进入子宫颈进行人工授精, 这种方法是无创伤性的, 对动物机体影响小;第二种是经子宫角直接注入精液, 是一种有创手术。这两种途径获得的结果是有差异的。 Fair S等用冷冻—解冻精子经子宫颈和腹腔镜技术进行人工授精后, 检查纯种Belclare 和Suffolk母羊的受精率。结果表明, 经腹腔镜子宫内人工授精的受精卵母细胞显著比经子宫颈受精羊的高 (54%∶19%) 。徐明等随机抽取210只羊进行腹腔镜子宫内输冷冻精液, 50只羊进行自然发情和子宫颈深部输冷冻精液, 150只进行自然发情和子宫颈部输新鲜精液。结果表明, 子宫内输冷冻精液情期产羔的母羊率同子宫颈输新鲜精液情期产羔的母羊率差异不显著, 但显著高于子宫颈深部输冷冻精液情期产羔的母羊率。Anel L等对Churra母羊经阴道和腹腔镜技术2种方法进行子宫内人工授精影响因素试验, 结果表明腹腔镜技术进行子宫内人工授精比经阴道人工授精有显著高的生育力 (44.89%∶31.25%) 。 3 适当提前时间 通过腹腔镜能直接观察到卵巢反应及两侧子宫发育的情况, 可以很直观地判断出母羊是否妊娠, 所以在诊断时间上可适当提前。 有学者应用腹腔镜进行妊娠诊断, 通过子宫和卵巢特征在妊娠第17天就可进行精确的诊断。羊妊娠30 天左右, 子宫角不对称, 孕角变得较粗, 弯曲减少, 空角仍呈弯曲状且较细, 可见子宫浆膜下的血管;45 d后, 可见子宫壁变薄, 血管变粗并呈树枝状。腹腔内窥镜妊娠诊断的最高准确率可达94.4%。 4 开腹和微创技术 由于羊无法通过直肠检查确定动物卵泡发育、排卵及黄体的形成和发育情况, 多数科研人员都是在手术操作的时候才能确定超排供体羊是否能进行胚胎移植, 这就造成了一些无效手术。王光亚等对30只羊的34次超排处理进行