养猪沼液的灭藻效果及微藻养殖的预处理.docxVIP

养猪沼液的灭藻效果及微藻养殖的预处理 生猪沼气的成分复杂，氮和磷含量高，具有丰富的有机物质。在开放自然环境中,养猪沼液非常有利于一些细菌、杂藻等微生物的生长繁殖,而这些微生物的出现又促进了其掠食者原生动物(如钟虫)、微型后生动物(如轮虫、线虫),甚至各种无脊椎动物幼虫(如孑孓)等的出现,从而构成了非常复杂的食物链［２］。在资源化利用养猪沼液的过程中,如果直接将微藻接种到养猪沼液中,就增加了食藻害虫的食源,同时微藻的快速繁殖也会促进养猪沼液中溶氧量的提高,刺激捕食者数量猛增,使得微藻被吞食而抑制生长,甚至全部消失。 养猪沼液中的食藻害虫可以捕食其中的细菌、 藻类和其他浮游动物［３］,而且有一部分原生动物能将微藻作为唯一的食物来源［４－５］。这些食藻害虫对不利环境的抵抗能力强［６］,可以通过分泌胶体形成包囊来抵抗不利环境,一旦环境好转,又开始迅速繁殖［７］,这也是养猪沼液中食藻害虫难以处理的原因之一。目前,已有较多关于食藻害虫治理的报道。如贾述竟［８］用制霉菌素处理钟形虫;徐晓平等［９］用溴氰菊酯处理轮虫;甘志凯等［１０］研究了pH对草履虫的杀灭作用,这些方法都取得了很好的杀虫效果。 但是养猪沼液中的食藻害虫种类比较复杂,而且养猪沼液的成分也复杂,以上方法均不适于养猪沼液的灭虫。因此,观察养猪沼液养殖微藻过程中出现的食藻害虫种类,并针对这些食藻害虫找到简单方便、高效环保的防控方法非常有必要。 本课题组在以往的研究过程中发现,利用养猪沼液养殖微藻的一个关键难点就是控制这些食藻害虫的繁殖。因此,对养猪沼液进行适当的预处理很有必要。考虑微藻养殖和养猪沼液净化的双重需求,预处理必须满足如下要求:(1)处理的药物成本、设备成本,以及处理方法的能耗要低;(2)处理后养猪沼液不能影响后期的微藻繁殖生长。本研究比较了不同预处理方法对养猪沼液的灭虫效果和后期微藻养殖的影响,拟优选出较佳的预处理办法,以期为利用养猪沼液实现规模化养殖微藻找出有效的途径。 本实验藻种小球藻(Chlorella vulgaris) FACHB-31(简称小球藻)由中国科学院武汉水生研究所淡水藻种库提供。 所用养猪沼液取自南昌市某公司的养猪场。 漂白粉,氨水,生石灰,盐酸,洗洁精,双效灵(主要成分是阿维菌素溶液)、鱼虫净(主要成分是溴氰菊酯溶液),甲维特杀(主要成分是甲氨基阿维菌素苯甲酸盐溶液),虫克AEC(主要成分是伊维多拉菌素原粉)。 1.2 主要设备 UV9100系列紫外—可见分光光度计、 LWD200-37FT荧光倒置显微镜、Mettler Toledo 320-S pH计。 1.3 实验方法 1.3.1 生物多样性测定 将小球藻按照20%(体积分数,下同)接种量接入100L用300目纱布过滤的养猪沼液中,置于玻璃温室内的开放式平板反应器中培养21d,每天搅拌3~4次,监测藻液中的生物种类和数量,并查阅相关文献和资料进行比对［１１－１２］。无脊椎动物个体较大,采用五点取样法直接计数,样方大小为20cm× 20cm×20cm,然后取平均值作为密度;其他生物个体较小,计数时采用五点取样法,5个取样点分别用胶头滴管取一滴管(0.05 mL,下同)藻液在显微镜下观察计数,再取平均值作为密度。 1.3.2 食藻害虫加样处理 将小球藻按照20%接种量接入10L用300目纱布过滤的养猪沼液中,当藻浓度明显开始下降、在显微镜观察下可以发现许多食藻害虫时,将藻液混合均匀,各取300 mL藻液加入到12个500 mL的锥形瓶中,编号为1~12号,各组处理方法见表1。 处理10、24h后分别在显微镜下观察各组藻液中的食藻害虫数量。 1.3.3 食藻害虫密度 将小球藻按照20%接种量接入10L用300目纱布过滤的养猪沼液中,当藻浓度开始下降、显微镜观察发现许多食藻害虫时,进行计数。将藻液混合均匀,分别取3滴管藻液进行计数,然后取平均值计算食藻害虫密度。再各取2L混均的藻液依次加入5个5L锥形瓶中,编号为1~5号,并分别按0、10、 20、30、40mg/L加入漂白粉,10、24h后在显微镜下观察食藻害虫密度。 1.3.4 食藻害虫群落检测 取500mL锥形瓶5个,分别编号为1~5号。 其中,1号加入200 mL静置10d的养猪沼液上清液;2号加入200mL经煮沸3min后再冷却至室温的养猪沼液;其他加入200mL用300目纱布过滤的养猪沼液。3号不处理作为对照组;4号加入40 mg/L漂白粉;5号用生石灰调节pH至12.00,2h后用盐酸调回pH至8.00。 然后将小球藻按照20%接种量接入各个锥形瓶,每天检测藻浓度(以680nm处的吸光度(OD６８０)表征),并用显微镜观察各组的食藻害虫群落变化。其中,4号接种后的第6天再次接入10%的小球藻。 1.3.5 养沼液的过滤 取500mL锥