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ph和nacl浓度对丝胶蛋白聚集微观结构的影响 丝胶蛋白功能生物材料的研究 近年来，微胶囊、可口服复合物或片剂的多功能生物载体的应用越来越受到重视。 生产生物载体的原材料应具有一些特殊性能, 如在pH、 离子强度、 温度和浓度等条件下具有合适的粒径, 形成合适的聚合形态以及特殊微观结构。 目前这类材料多是化学合成, 材料的安全性日益引起社会关注, 天然无害的生物材料将成为健康安全食品医药的新趋势。 在过去的几十年里, 蛋白质和多糖等生物大分子聚合物已经引起科学家的注意。 应用这些材料制备生物载体, 必须先了解材料的基本物理化学特性。 pH和盐对生物材料影响的相关理论、 模型和试验数据已经有大量的研究报道。 丝胶是包覆在丝素蛋白外层的具有粘性的、 水溶性的球状蛋白。 大量的研究证明, 丝胶具有抗氧化、 抗紫外辐射、 抑菌、 抑制酪氨酸酶和激酶活性等功能活性, 且吸水性和持水性良好。 因此丝胶具有作为多重功能活性生物材料的潜能。 目前关于丝胶蛋白基本物理化学性质的研究相当有限, 限制了丝胶蛋白作为生物材料的应用。 本文研究了pH和NaCl浓度对丝胶蛋白粒径分布以及微观结构等物理化学特性的影响。 采用Zeta电势法测定了丝胶蛋白的等电点, 探讨了丝胶蛋白表面电荷随环境pH和离子强度变化的影响。 应用动态光散射法 (dynamic light scattering, DLS) 探测了丝胶蛋白颗粒的粒径分布和变化, 结合透射电镜 (transmission electron microscopy, TEM) 和近红外光谱 (infrared spectroscopy, IR) 分析了丝胶蛋白聚集的微观结构和构形变化, 为丝胶蛋白生物材料的应用提供了理论依据。 1 材料和方法 1.1 除杂质,润洗润洗 桑蚕 (Bombyx mori. L) 蚕茧剪成约1 cm2大小, 用自来水仔细淘洗去除杂质, 用蒸馏水润洗。 洗净的蚕茧以25∶1 (w/v) 的比例加蒸馏水于沸水下煮2 h, 收集丝胶溶液、 浓缩、 冻干备用。 1.2 na4r65 FTIR光谱分析采用Nicolet Magna 4R 560, 分辨率为4 cm-1。 干燥的丝胶蛋白粉末与FTIR级KBr混合均匀, 压成薄片, 即刻进行FTIR扫描。 1.3 zeta电势的测定 采用Zetasizer ZS-90电势粒径仪 (Malvern Instruments Ltd., Malvern, UK) 测定丝胶蛋白溶液的zeta电势。 丝胶蛋白浓度为0.2 mg·mL-1, 用HCl和NaOH调整pH后立即测量。 1.4 关于系统固有定理的测量,有相关说明的说明,有以下几个 采用基于电荷斥力和范德华吸引力平衡的DLVO理论模型来建立丝胶蛋白颗粒聚集模型。 胶体系统的相对稳定或者聚沉取决于斥力能和吸力能共同作用结果的推斥能VR的大小, 推斥能VR随粒子间距离x的变化而变化该模型在相关文献中有详细论述。 VR=Aψ2exp(?κx)(1)VR=Aψ2exp(-κx)(1) 其中A为系统固有常数,ψ为zeta电势,κ-1为粒子双电子层的Debye-Huckel长度或厚度 κ=B?I√(2)κ=B?Ι(2) 其中B是电解质溶液的固有常数,I是离子强度, 离子强度可以用电导仪测定。 由方程 (1) 和方程 (2) 推导出方程 (3) x=ln(Aψ2VR)/BI√(3)x=ln(Aψ2VR)/BΙ(3) 当VR=1 kT时, 方程 (3) 可以简化得到方程 (4) x∝ln(|ψ|)I√(4)x∝ln(|ψ|)Ι(4) 方程 (4) 中, 粒子间的距离与zeta电势的对数ln (|ψ|) 成正比, 与离子强度I1/2成反比。 1.5 mw瞳余光粉的表征 丝胶粒径采用NICOMP380 ZLS-Zeta电势/粒径仪测定, 工作条件为5 mW 氦氖光源, 波长632.8 nm, 散射角度90°, 温度25 ℃。 丝胶浓度为0.2 mg·mL-1, 经0.45 μm过滤器过滤, 样品用HCl或NaOH溶液调整pH。 计算机自动对光密度进行收集, 采用累积分析法得到丝胶蛋白粒径及其分布。 1.6 扫描电镜sem 采用JEOL JEM-1230透射电镜对颗粒的微观结构进行了扫描, 电镜工作电压为 80 kV。 取一滴0.2 mg·mL-1的丝胶蛋白溶液置于铜网格上, 多余的溶液用无尘滤纸移除, 空气中风干约10 min, 将铜网置于在透射电镜下扫描。 2 结果与讨论 2.1 蛋白结构的测定 图1为丝胶蛋白冻干粉末的IR光谱, 图谱中只有酰氨Ⅰ带1 700～1 600 cm-1附近有较强吸收峰, 主要是蛋白质中CO伸缩振动引起, 一般认为,β-折叠和无规则卷曲分别在1 630和1 650 cm-1附近有较