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hbsag酶联免疫吸附试剂盒二次利用可行性分析 目前，采用酶联免疫吸毒仪检测乙发育醇酯表面活性剂的首选方法是许多实验室的首选方法，尤其是在健康体检方面的大幅剂量。判断结果时,通常是用目测法。在有多余酶试剂的情况下, HBsAg酶联免疫吸附试剂盒能否进行二次利用?其准确性、重复性如何?至今尚未见这方面的报道。我们针对此课题进行了实验,现报告如下。 1 材料和方法 1.1 阴性结果实验 由英科新创(厦门)科技有限公司生产。经首次使用后(目测结果,未加终止液)挑选阴性结果的测试孔,用自来水洗4次,拍干水份,置冰箱保存备用(简称二次利用板)。 1.2 样本来源 363份HBsAg阳性及159份HBsAg阴性的血清,由体检人群中,随机抽取。 1.3 样品检测及数据判断 按厂家提供的作用说明书操作:加血清50μl于相应测试孔中,分别在每孔中加入酶标记抗体50μl,轻拍混匀,置37℃暗处25min,室温平衡5min,在电脑洗板机中用洗涤液洗涤5次,完后扣干,每孔加底物A、B 各50μl,轻拍混匀,置37℃15min。目测或加终止液50μl混匀,上机用酶标分析仪读数,判断结果。临界值=阴性对照OD均值N×2.1;阴性对照OD均值大于0.1时应重新试验,小于0.05时以0.05计算。结果判断:样品OD值S/C.0≥1 HBsAg阳性;1者为HBsAg阴性。 1.4 x-711酶指数分析仪 上海迅达医疗仪器有限公司生产;自动酶标洗板机:北京拓普分析仪器有限公司生产。 2 结果 2.1 hbsag血清样本的准确性的测定 对363份HBsAg阳性标本及159份阴性标本,分别用同一批号的试剂盒及二次利用板测试,占目测结果,再加终止液上机测试其结果见表1。 2.2 吸收亮度的比较 对19份HBsAg阳性血清,分别测其二次利用前、后的吸光度,其结果见表2。 2.3 吸收层的精度比较 对6份阳性血清,分别进行多次二次利用前、后的测试,上机测其吸光度,见表3。 2.4 使用第2部分保存时间和结果 制备好的二次利用板,经第1d、第5d、第10d、第15d、第60d各用相同的阳性血清测定1次,其结果见表4。 3 次利用的吸光度 3.1 对363份HBsAg阳性标本及159份HBsAg阴性标本,用同一批号的HBsAg酶联免疫吸附试剂盒及当天制备的二次利用板进行测定,结果经过目测判定和酶标仪判定:阳性标本准确率为100%,阴性标本中有2份标本为目测判定弱阳性,酶标仪判定为阳性,阴性标本准确率为98.7%(χ2=1.9×10-2,P0.05),二次利用前、后的实验结果差异无显著性的意义;造成假阳性的原因,可能是制备二次利用板时,有部分略 显色的测试孔未去除。提示:首次使用后的HBsAg酶联免疫吸附盒,可以进行二次回收利用,用于对HBsAg标本的测定,但对结果阳性的标本,建议用新的试剂复查。 3.2 在对二次利用前、后试剂的吸光度比对试验中,虽然,二次利用前阳性标本、空白值、阳性对照的吸光度,均要高于二次利用的吸光度(t=5.25,P0.01),其吸光度差异具有非常显著性的意义,但二次利用的吸光度呈整体降低(阴性对照除外,见表2),并不影响目测和酶标仪的判断结果。因为吸光度法是测定若干阴性对照标本,定出上限,以待测标本OD值大于该上限者为阳性;或以阴性标本OD均值+2个标准差作为阴性和阳性的界限。造成吸光度下降的原因,可能是试剂盒测试孔的包被物,经多次洗涤后,浓度有所降低。 3.3 相同的样本在二次利用前、后,经多次测定,二次利用的标本吸光度平均值均降低(t=3.97,P0.01),差异有非常显著性的意义,但吸光度的精密度(SD)(t=2.41,P0.05),差异无显著性的意义。见表3。 3.4 对制备二次利用测试孔所用洗涤液的比较中,用随试剂盒所附洗涤液稀释后(pH=7.4)洗涤5次的检测效果比用自来水(pH=6.0,游离余氯=0.05mg/L)洗涤5次的效果更差。两种洗板液所制反应板的目测阳性检出率之间的差异有非常显著的意义(χ2=9.6,P0.01);而上机判断则差异无显著性的意义(χ2=2.03,P0.05)见表4。原因可能是缓冲洗涤液,更易洗脱包被物,使包被物浓度下降,造成检测结果的假阴性。建议使用自来水或蒸馏水(pH=6.0,游离余氯0.05mg/L)来洗涤,且洗涤次数为4次为宜。 3.5 对二次利用板保存时间的观察中发现:用自来水制备的二次利用板从第1d到第60d的阳性标本检测中,目测和酶标仪判定结果均为阳性,准确率为100%;而用缓冲液制备的二次利用板,在制备当天使用,准确率为100%;第5d以后的显色反应明显下降,目测判定为微弱阳性,显色反应越来越差,假阴性也随之增高(见表4)。 3.6 我们曾对别的厂家生产的产品,也做过二次利用试验,但以失败告终。提