离体蟾蜍心脏灌流.docVIP

离体蟾蜍心脏灌流 【摘要】将蟾蜍的心脏完整离体，插入挖心套管，分别用氯化钠，氯化钾，氯化钙，肾上腺素和乙酰胆碱处理，可观察到不同药物对心脏的影响。氯化钠，氯化钾与乙酰胆碱均使心搏减弱，氯化钙与肾上腺素能加强心脏收缩力和心率。 【实验材料】 动物：中华蟾蜍 试剂：5%氯化钠溶液；1%氯化钾溶液，2%氯化钙，任氏液（Ringer’s solution），1：100000肾上腺素溶液，1：100000乙酰胆碱溶液，任氏液 器材：蛙类手术器械，BL420E+生物机能分析系统，张力换能器，蛙心套管，试管夹，滑轮（杠杆） 【实验内容】 离体蟾蜍心脏的制备(1)取一蟾蜍毁其脑和脊髓，仰位固定于蛙板上，暴露心脏。(2)心脏插管 分支前的主动脉下穿一线并打一松结备用 ，左侧主动脉穿一根线并结扎之，用左手提起结扎线，右手用眼科剪在左侧主动脉距分叉部3mm处剪一“V”型口。将盛有少量任氏液的蛙心套管(用拇指将套管堵住，以防套管中的任氏液流出)从“V”型口插入动脉球底部，然后稍后撤套管，再转向心室中央方向插入，可见液面随心搏升降即可。将分支前主动脉下的松结扎紧，并固定在套管的小突上。小心提起套管和心脏，剪断主动脉左右分支；结扎与静脉窦相连的后腔静脉，并在结扎线以下剪断，将心脏摘出。2.观察项目(1)开启系统，描计一段正常心搏曲线。注意观察心跳频率和强度以及心脏的收缩、舒张程度。(2)向蛙心套管内滴加5%NaCl溶液，观察心跳变化。(3任氏液洗脱，待心跳恢复，加入2%氯化钙溶液1～2滴，观察心跳变化。(4)任氏液洗脱，待心跳恢复，加入1%氯化钾溶液1～2滴，观察心跳变化。(5)任氏液洗脱，待心跳恢复，加入1:100000肾上腺素溶液2～3滴，观察心跳变化。(6)任氏液洗脱，待心跳恢复，加入1:100000乙酰胆碱溶液1～2滴，观察心跳变化。 【实验结果】 加入各种药品后心脏心搏曲线变化如图所示 图一：NaCl对心脏的影响 图二：Kcl对心脏的影响 图三：CaCl2对心脏的影响 图四：肾上腺素对心脏的影响 图五：乙酰胆碱对心脏的影响 【实验讨论】 1、滴加氯化钠溶液，心跳显著减弱。 心肌细胞的收缩对细胞外的浓度有很高的依赖性，因其是触发心肌质网释放的关键。当在任氏液中滴加氯化钠时，Na+与内流的竞争性抑制导致内流减少，心肌的收缩活动也随之减弱。 若细胞外离子浓度低至接近零时，虽然心肌细胞仍能产生动作电位，但没有 的内流，不能引起收缩。即“兴奋-收缩脱耦联”。 2、滴加氯化钾溶液后，心跳减弱至停止 本实验所用的氯化钾浓度对于蟾蜍体液来讲属于较高浓度，而细胞外K+浓度较高时K+与 有竞争性拮抗作用，K+可抑制细胞膜对的转运，使进人细胞内减少，心肌的兴奋一收缩耦联过程减弱心肌收缩力降低。且当细胞外K+浓度较高时，膜内外的K+浓度梯度减小，静息电位的绝对值过度减少，Na+通道失活，心肌的兴奋性完全丧失，心肌不能兴奋和收缩，停止于舒张状态。此时，仅由 来构成动作电位，钙通道激活慢，因此去极化上升幅度小而缓慢，使兴奋传导性降低。而当K+浓度增高值不大时，由于膜对K+的通透性较大，静息电位主要由细胞内外K+浓度差决定，当K+浓度稍升高时，静息电位升高，与阈电位差值减小，使细胞兴奋性增加。当细胞外K+浓度升高时,细胞膜对钾的通透性升高,心室肌细胞复极过程加速,平台期缩短,不应期也缩短。均能增加工作细胞的收缩舒张速率。 滴加氯化钙溶液中，离体蛙心收缩力显著增强 首先浓度上升，内流增加，导致心肌质网释放量增加，使心肌收缩力增强。 内流是慢反应细胞（如窦房结P细胞）0期去极化和快反应细胞（工作细胞）2期的主要离子活动.当细胞外浓度升高时，内流加快,慢反应细胞0期去极化加快加强，传导性升高。 当肌浆中的浓度不断升高，与肌钙蛋白结合数量不断增加，甚至达到只结合不解离的程度，于是，心肌将会处于持续收缩状态，称为“钙僵”。 但同时，浓度上升，与Na+内流竞争性抑制作用使得Na+内流降低，从而触发Na+快速内流产生0期去极化就比较困难,使阈电位上升，与静息电位的差距增大，兴奋性降低。发生兴奋后，Na+内流的抑制则导致0期去极化速度和幅度降低,传导性下降。 4、滴加肾上腺素后，蛙心收缩增强 在心肌细胞起作用的主要是去甲肾上腺素。去甲肾上腺素与心肌细胞膜上的β肾上腺素受体结合,激活腺苷酸环化酶(AC),使细胞内cAMP浓度升高,激活PKA和细胞内的蛋白质磷酸化过程,使心肌细胞膜上的钙通道激活，动作电位平台期Ca2+内流增加，心肌收缩力增强。另外去甲肾上腺素能加强4期的内向电流If,对浦肯野细胞影响较大，使心率加快。 另外，肾上腺素还能降低肌钙蛋白与亲和力，促使肌钙蛋白对的释放速率增加，导致了心肌细胞收缩能力的增强。肾上腺素也能提高肌浆网膜摄取的速度，刺激Na+—