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微乳提取串联浊点浓缩分离姜黄中总姜黄素 姜黄是姜科植物的姜黄。它有辛、苦、性温、无权。对血液、气体和经络疼痛都有有效的治疗。姜黄提取物的主要成分为略带酸性的酚性物质, 是姜黄素、去甲氧基姜黄素、二去甲氧基姜黄素的混合体, 称之为总姜黄素。总姜黄素具有抗氧化、抗炎、抗病毒、抗动脉粥样硬化、抗纤维化、抗诱变、抗癌、保肝、利胆等广泛药理活性〔2, 3〕, 是一种很有开发前景的天然化合物。总姜黄素的水溶性差, 提取困难, 目前研究从姜黄中提取姜黄色素的报道很多〔4-6〕, 有碱水提取法、有机溶剂提取法、超声波提取法、超临界提取法、乳化剂协同法等, 但都包含提取和精制两大步骤, 较为复杂。因此本实验从微乳提取中药活性物质技术角度对姜黄中总姜黄素的提取工艺进行研究, 用简单可行的方法, 从姜黄中提取较大量的总姜黄素。 1 设备和材料 1.1 仪器、检测仪器 752型紫外可见光分光光度计 (上海霸宇恒平科学仪器有限公司) ;TD280-2B型台式离心机 (上海安享科学仪器厂) ;KH-400KDB型高功率数控超声波清洗器 (昆山禾创超声仪器有限公司) ;粒度测定仪 (Zetasizer 1000HS, 马尔文) ;高效液相色谱仪 (Shimadzu公司产品) :LC-10ATvp型泵, SPD-10Avp型紫外-可见检测器, CTO-10ASvp型柱温箱, CBM-20A型液相控制器, SIL-20A型自动进样器 (Prominence公司) ;Kromasil C18(250 mm×4.6mm, 5μm) 。 1.2 试验用姜黄的药物 姜黄素对照品 (科密欧, 质量分数98%, 批号:100501) , 去甲氧基姜黄素、二去甲氧基姜黄素对照品 (自制, HPLC面积归一化法测得质量分数98%) 。试验用姜黄购于采芝林药店 (产地:山西) , 经广东药学院生药教研室李钟副教授鉴定为姜科植物姜黄Curcuma longa L.的干燥根茎。油酸乙酯、无水乙醇、1, 2-丙二醇、聚乙二醇-400、正丁醇均为分析纯;OP乳化剂、吐温-80、聚乙二醇辛基苯基醚、聚氧乙烯蓖麻油EL均为化学纯;葵花油、大豆油、花生油;乙腈 (德国默克公司, 色谱纯) ;超纯水 (屈臣氏蒸馏水) 。 2 方法和结果 2.1 标准曲线的绘制 精密称取姜黄素对照品2.0 mg及去甲氧基姜黄素、二去甲氧基姜黄素对照品各1.0mg, 于25 m L棕色量瓶中, 加甲醇溶解、定容, 摇匀。精密吸取该溶液0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 m L分别置10 m L棕色量瓶中, 加甲醇定容, 摇匀, 0.45μm微孔滤膜滤过, 即得各浓度对照品溶液。采用HPLC法〔7〕, 测定姜黄素、去甲氧基姜黄素和二去甲氧基姜黄素的含量, 三者之和为总姜黄素的含量。以0.01 mo L/L磷酸二氢甲缓冲液-乙腈 (50∶50, p H=2.5) 为流动相, 检测波长为425 nm, 流速为1.0 m L/min, 进样量为20μL, 记录峰面积, 重复测定3次, 以浓度为横坐标, 峰面积为纵坐标, 绘制标准曲线。姜黄素、去甲氧基姜黄素、二去甲氧基姜黄素回归方程分别为:Y1=3.919×107C1-1.614×104, r1=0.9999;Y2=4.139×107C2-3.949×103, r2=0.9998;Y3=4.251×107C3-7.129×103, r3=0.9998。线性范围分别为0.00480~0.07680 mg/m L、0.00258~0.04120 mg/m L、0.00263~0.04200mg/m L。结果表明姜黄素、去甲氧基姜黄素、二去甲氧基姜黄素在相应的浓度范围内线性关系良好。 2.3 测定总姜黄素溶解量的方法确定表面活性剂的制备方法 将过量的姜黄素分别加入大豆油、花生油、油酸乙酯和葵花油中, 在功率为280 W、温度为40℃的条件下超声30 min, 静置2 h在3 000 r/min条件下离心5 min;精密吸取上述样品的上清液10μL至100 m L量瓶中, 加75%乙醇定容, 摇匀;精密量取各空白油相10μL至100 m L量瓶中, 加75%乙醇定容, 摇匀, 以此作为上述各样品所对应的空白溶液, 在425 nm处, UV法测定各样品的吸光度, 每个样品测定3次取平均值, 根据总姜黄素的标准曲线得出姜黄素的溶解量, 选出溶解量最大的油相。以同样的方法选出溶解量最大的表面活性剂。结果见表1。 2.4 peg-400添加量的限制 取OP乳化剂4 g、油酸乙酯1.2 g, 混匀, 加水至20 m L, 形成混浊不透明的乳剂, 取1 m L, 滴加入无水乙醇、1, 2-丙二醇和正丁醇后, 溶液变的更浑浊, 不能形成澄清透明的溶液;加入PEG-400 0.628 g后