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利文斯顿雏菊花色素成分及其稳定性分析 梨花是一种水生百合属植物，属潘木科中花。在南非地区，它以其丰富而鲜艳的颜色被广泛使用。花色是决定花卉观赏价值的一个重要因素,花色素是花色形成的物质基础,因此分析花瓣中色素的成分对于探讨花色形成机理及分子育种具有重要意义。决定花卉颜色的物质主要有类黄酮、类胡萝卜素、生物碱共3大类色素,目前有关花色素的研究主要集中在花色素的提取及其稳定性方面,且在小苍兰、腊梅、高山杜鹃、金盏菊、菊花、向日葵、扶桑、紫花地丁等植物中已有报道,但有关利文斯顿雏菊花色素的研究尚未见报道。为此,本研究参考传统花色素的研究方法,提取了利文斯顿雏菊8个品系的花色素,初步确定了其花色素的种类,并探讨了温度和光照对其花色素稳定性的影响,以期为草花花色形成机理及育种研究提供参考。 1 材料和方法 1.1 用于不同品系的制备 供试利文斯顿雏菊为2006年从加拿大温哥华引进,经过2年栽培后,已经基本适应本地气候,其共有8个品系,分别为白色品系、橙色品系、粉红内白品系、粉红内黄品系、玫红内白品系、玫红内黄品系、黄色品系和西瓜红色品系,将这8个品系种植于西北农林科技大学园艺试验场内,在盛花期,于早晨剪取各品系刚盛开的花朵,放入封口袋,带回实验室后置于-70 ℃保存备用。 1.2 方法 1.2.1 盐酸甲醇提取液制备 取各品系花瓣2 g放入液氮中迅速研磨,加入20 mL体积分数1%盐酸甲醇溶液后,于4 ℃下避光浸提12 h,将提取液用0.45 μm有机滤膜过滤定容至25 mL,过滤液于-20 ℃保存。 1.2.2 提取液的制备 取各品系新鲜舌状花瓣0.2 g,分别放入5 mL石油醚、体积分数10%盐酸以及30%氨水中,迅速研磨成匀浆,过滤,以潘通国际通用C/U色卡作参考,对提取液进行特征颜色反应。 1.2.3 素-苏-酸缩合反应 取2 mL 1.2.1节制备的各品系的色素提取液,分别与盐酸-锌粉、盐酸-镁粉、硼氢化钠、氯化铝、氯化铁、醋酸铅、硼酸、碳酸钠和浓硫酸等9种化合物进行显色反应。 1.2.4 特征吸收峰的测定 以体积分数1%盐酸甲醇溶液为空白,分别取1.2.1节制备的8个品系的色素提取液1 mL,稀释20倍后,利用紫外-可见分光光度计进行扫描,测定各品系花色素在200～800 nm内的特征吸收峰。 1.2.5 温度和光对花色素稳定性的影响 (1) 温度对吸光度的影响 取1.2.1节制备的各品系的花色素提取液2 mL,稀释20倍后分别于30,40,60,80和100 ℃下放置30 min,冷却至室温后在530 nm处测定其吸光度。每个样品重复3次,结果取平均值。 (2) 灯光对测定 取1.2.1节制备的各品系的色素提取液2 mL,稀释20倍后分别置于200 lx灯光照射和暗室内,并在0,2,4,6,8,10 d时取样,于530 nm处测定其吸光度。 2 结果与分析 2.1 花色素中黄酮类化合物 对利文斯顿雏菊8个品系花色素成分进行定性分析,结果见表1。 由表1可见,利文斯顿雏菊8个品系在石油醚中均表现为无色,说明其花色素中均不含类胡萝卜素。在花色素与盐酸的反应中,玫红内白、玫红内黄和西瓜红色3个品系显示不同程度的红色,说明这3个品系的花色素中均含花色素苷;其余5个品系均显示不同程度的黄色,说明其花色素中含黄酮类化合物。在花色素与氨水的反应中,8个花色品系均呈现不同程度的黄色,而未出现橙红色或红色,说明利文斯顿雏菊花色素中可能含黄酮、黄酮醇类和查耳酮类物质,但不含橙酮。 2.2 化合物显色反应 将利文斯顿雏菊8个品系的花色素提取液分别与盐酸-锌粉、盐酸-镁粉、硼氢化钠、氯化铝、氯化铁、醋酸铅、硼酸、碳酸钠和浓硫酸等9种化合物进行显色反应,结果见表2。 (1) 玫红内黄品及红色素苷类物 在利文斯顿雏菊的8个品系中,玫红内白品系和玫红内黄品系呈现紫红色,其他6个品系均呈现无色,表明前2个品系的花色素中可能含二氢黄酮类物质和花色素苷,且色素的C3位可能连有羟基。 (2) 黄酮的花色素 在利文斯顿雏菊的8个品系中,白色、粉红内白、粉红内黄和黄色4个品系均呈无色,说明其花色素中可能含有查耳酮、橙酮或儿茶素;其他4个品系均呈现不同程度的红色,说明其花色素中可能含黄酮、二氢黄酮、花色素苷及异黄酮。 (3) 利文斯顿幼菊主要成分的变化 此反应是鉴别二氢黄酮专属性的较好的还原反应,只有二氢黄酮和二氢黄酮醇类物质能被还原。在利文斯顿雏菊的8个品系中,粉红内黄品系和玫红内黄品系呈现红色,表明其花色素中含二氢黄酮类化合物;橙色品系和西瓜红色品系呈现黄色,其他4个品系均呈现无色,表明其花色素中不含二氢黄酮或二氢黄酮醇。 (4) 黄、西瓜红色中花色素苷的变化 在利文斯顿雏菊的8个品系中,玫红内白、玫红内黄和西瓜红色3个品系呈现出不同程度的红色,说明其花色素中