2型糖尿病模型的建立及卷柏不同溶剂提取物对降糖活性的影响.docxVIP

2型糖尿病模型的建立及卷柏不同溶剂提取物对降糖活性的影响 随着社会经济的发展和人们生活水平的提高，糖尿病的发病率逐年增加，已成为危害人类健康的主要疾病之一。超过90%的糖尿病患者是2型糖尿病患者。因此，例如，在人类2型糖尿病发病过程中开发出相似的动物模型对探讨糖尿病的发病机制和防治方法具有重要意义。本实验运用高糖高脂饲料结合小剂量STZ一次性腹腔注射的方法,建立了2型糖尿病的大鼠模型,并运用此模型比较了卷柏不同溶剂提取物的降糖活性,为将卷柏开发为新的降糖药物提供了实验依据。 卷柏(Selaginella tamariscina(Beauv.)Spring)为多年生草本植物,为蕨类卷柏科(Selaginellaceae)卷柏属(Selaginella)植物卷柏的全草,本实验室前期对卷柏化学成分进行了全面系统的研究,从中分离得到大量的黄酮类、木脂素类、核苷类和其他多酚类化合物成分[1~6]。并对其药理活性进行了初步的研究,我们在采用去卵巢大鼠模型研究卷柏降血脂作用时,意外发现该模型血脂升高的同时出现了高血糖症状,而卷柏组在降低血脂的同时还有非常好的降糖作用[7~9]。文献报道及现代研究表明卷柏亦具有降血糖作用。在进一步研究过程中我们发现,卷柏所含的黄酮类成分可能是其发挥降糖作用的有效成分,同时还发现卷柏乙醇提取物比卷柏水提物黄酮含量高[12~17]。本实验是在前期实验的基础上,通过整体动物实验的方法,探讨不同提取方法对卷柏降糖活性的影响,以期优化提取方法,为下一步的新药研发奠定基础。 1 材料和方法 1.1 动物驱动模型 雄性SD大鼠80只,体重180~200 g,购于河北医科大学实验动物中心,动物合格证号为SCXK(冀)2003-1-003,实验期间在二级动物房喂养,环境温度为25℃±1℃。 1.2 试剂 链脲佐菌素:购自sigma公司;葡萄糖检测试剂盒:购自中生北控生物科技股份有限公司;胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-c)、高密度脂蛋白(HDL-c)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)测定试剂盒:购自上海长征生化试剂有限公司;基础饲料:为郑州大学实验动物中心提供,高糖高脂饲料配方:10%猪油、20%蔗糖、10%蛋黄、60%基础饲料,由郑州大学动物实验中心加工制成。 1.3 水浴箱-uv-2031 奥林巴斯AU400全自动生化分析仪;可见-紫外分光光度计(岛津UV-2201);电热恒温水浴箱;KDC-160HR高速低温冷冻离心机(科大创新股份有限公司中佳分公司)、电子天平、电子读数分析天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司产品)、超低温冰箱等。 1.4 卷柏醇提物etoh-pcract的提取 卷柏采自河南西峡,经河南中医学院陈随清教授、董诚明教授鉴定为卷柏属植物卷柏(Selaginella tamariscina(Beauv.)Spring)。卷柏8.98 kg 70%乙醇回流提取3次,过滤,合并滤液,减压浓缩,真空干燥得卷柏醇提物823.5 g(Et OH-extract);卷柏40 kg加10倍量水煎煮3次,过滤,合并滤液,减压浓缩,真空干燥得卷柏水提物6.5 kg(H2O-extract),卷柏水提物提取由河南中医研究院协助完成。 1.5 实验方法 1.5.1 大鼠模型建立方法 80只大鼠适应性喂养1周,按体重均衡原则随即抽出10只做为正常对照组,给予基础饲料喂养;其余70只,给予高糖高脂饲料喂养,自由饮水。4周后,大鼠禁食12 h,高糖高脂饲料组一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)溶液35 mg/Kg(STZ临用前用0.1 mol/L柠檬酸-檬酸钠缓冲液配制成1%浓度,调p H值至4.21,操作均在冰浴中进行)建立糖尿病大鼠模型;正常对照组腹腔注射同剂量柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。注射STZ 72 h后大鼠禁食12 h,尾静脉取血,3 500 r/min离心10 min,分离血清,检测空腹血糖,空腹血糖大于或等于11.1 mmo1/L的动物为造模成功的大鼠。 1.5.2 制备二甲双钺胃 将造模成功的大鼠随机分为模型对照组、卷柏醇提物组、卷柏水提物组、二甲双胍组。正常对照组与模型对照组:每天清晨蒸馏水灌胃;二甲双胍组:每天清晨以200 mg/kg二甲双胍灌胃;卷柏醇提物组:每天清晨以210 mg/kg卷柏醇提物灌胃,卷柏水提物组:每天清晨以312mg/kg卷柏水提物灌胃,连续灌胃3周,每周称一次体重,调整灌胃体积,灌胃体积均不大于4 ml,卷柏醇提物和卷柏水提物均按临床用药的20倍换算,所有大鼠喂养期间均自由进食饮水。 1.5.3 指标报告 1.5.3. 1一般情况 1.5.3. 2.体重测量 1.5.3. 血糖含量检测方法 大鼠STZ注射72 h后和给药3