分子生物学：J-DNA测序-PCR.pptVIP

DNA序列测定 末端终止法 模板（待测单链DNA） 引物（1条） 四种dNTP(其中一种用32P/35S标记) 终止剂(ddNTP) DNA聚合酶 分别得到ddA ddT ddG ddC结尾的片段 Sanger发明：两次获得诺贝尔奖 测序过程: 1. 模板与引物杂交 2. 引物的延长和合成阻断 四个管分别加入： DNA聚合酶、dNTP标记底物 终止剂不同：ddATP、ddGTP、ddCTP、ddTTP 四个管中所有产物是一系列长度只差一个核苷酸的聚合链 3. 电泳：ACGT次序(4个泳道) ， 高压电泳 4. 放射自显影得到直读图象 美国ABI公司3730型全自动DNA测序仪 J3 聚合酶链式反应 Polymerase Chain Reaction （PCR） J3-1 PCR的概念 利用与DNA模板序列的两端互补的一对寡聚核苷酸引物来扩增这段DNA序列的反应。 一、PCR的基本原理 PCR的基本原理 变性、复性、半保留复制 PCR三步曲 变性 90～97℃ 退火 45～55℃ 延伸 72℃左右 J3-2 The PCR cycle PCR循环 Denaturation变性: 目标DNA (模板)在加热 (95℃)条件下，变成两条单链. Primer