Ubp3对酵母细胞中游离K63泛素链的降解作用研究的中期报告.docxVIP

Ubp3对酵母细胞中游离K63泛素链的降解作用研究的中期报告 序言 K63链化的泛素是一类在细胞信号转导中起重要作用的泛素连接物，其通过与信号转导组件结合促进特定信号通路的激活或下调，从而参与调节基因表达、细胞增殖、免疫应答等生物学过程。K63泛素链的动态修饰在细胞过程中受到复杂调控，其中泛素酶的作用是其中一种重要的调控机制。Ubp3是酿酒酵母中的K63链特异性泛素酶，其在游离K63链的降解中起到重要作用。因此，本文将围绕Ubp3对酵母细胞中游离K63泛素链的降解作用进行研究，进一步揭示Ubp3在调节K63泛素链修饰水平上的功能。 材料与方法 实验材料： 酵母菌株：野生型酿酒酵母（S. cerevisiae） 实验仪器：低温离心机，超速离心机，杂交仪，PCR仪，蛋白质电泳仪等。 实验方法： 1.构建Ubp3基因敲除菌株 采用PCR法扩增Ubp3敲除基因片段并构建敲除菌株。 2.检测菌株中K63泛素链的含量 采用Western blotting方法检测 Ubp3敲除菌株和野生型菌株中游离K63泛素链的含量。 3.观察Ubp3对菌株中K63链水平变化的影响 采用菌落形态观察法检测Ubp3敲除菌株和野生型菌株在高碘酸钾（KIO3）条件下的生长情况，进一步观察Ubp3对K63链水平变化的影响。 预期结果 通过敲除Ubp3基因，预期会导致K63泛素链的积累，从而影响细胞各种生理参数。Western blotting检测结果将验证敲除Ubp3基因是否导致K63泛素链的含量增多。进一步，通过菌落形态的观察，预期会发现敲除Ubp3基因的菌落在高碘酸钾环境下生长缓慢，生长规律发生变化，进一步证实了Ubp3在调节K63泛素链修饰水平上的重要性。 结论 本文将通过研究Ubp3对酵母细胞中游离K63泛素链的降解作用，揭示K63泛素链修饰水平调控机制中泛素酶的作用。通过敲除Ubp3基因的实验，将进一步验证Ubp3在K63泛素链的降解机制中的重要作用，并为深入探究Ubp3在细胞SOS信号通路调控中的作用提供基础。