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一种十二齿小蠹伞滑刃线虫的鉴定 2007年12月，宁波出入境检验检疫实验室从德国质量薄膜中删除了12个牙齿的滑移液甲虫。这是中国港口首次发现这条线虫，中国没有关于这条线虫的报道。现将结果报道如下。 1 材料和方法 1.1 样本采集 该批货物来自德国, 松木包装上有溴甲烷熏蒸处理标记, 蓝变症状不明显, 未发现昆虫为害状。采集数块木段送实验室检测。 1.2 对线虫的分离、培养和形状的评价 1.2.1 线分离 1.2.2 纯线虫培养 1.2.3 形态特征观察 用Zeiss Axioskop 40显微镜和Leica DFC 320数码相机对线虫的整体形态和内部特征进行观察、摄影, 并用De Man公式法进行形态特征测计。根据形态特征和测计结果, 结合相关文献, 对该线虫种类进行鉴定。 1.3 评估屋顶层 1.3.1 蛋白质pcr法 挑取1～5条线虫放入预先加有8μL ddH2O的离心管中, 后加入1μL 10×PCR缓冲液和1μL蛋白酶K (1 mg/mL) , 混合并简单离心, 放入-70℃冰箱冷冻数小时或过夜。取出后放入PCR仪 (或水浴锅) , 65℃保温1 h, 95℃10 min。制备的DNA模板直接用于PCR扩增反应。 1.3.2 taq酶3-3和3-3-3,3-3,5-内镜引物3,3.2.3,4.3.3.3,5.3.3.3.3.3,5.3.3.3.3.3.3.3,5.3.