第十三章植物病害诊断课件.pptxVIP

第三节 实验室常规诊断 v 在田间诊断中，诊断者凭借自己的经验和知识，利用 放大镜观察病斑上的病征，对熟知的病害可以做出正确 的诊断。 v 但是在多数情况下由于症状表现的复杂性，病原的隐 蔽性，诊断者不应当仅靠田间观察就作出诊断。而应采 集有代表性的标本到实验室做进一步检查，借助实验技 术做出正确诊断。 1 一、真菌病害 v 病斑上已产生子实体的真菌病害可直接采用显微镜镜检 l 挑 l 撕 l 压 l 切 2 一、真菌病害 v 对看不到真菌结构的标本保湿培养 l 适温(20~25oC) l 高湿(100%RH) l 24~74小时 3 二、细菌病害和菌原体病害 v观察溢菌现象 v但瘤肿病害的组织中菌体较少，观察不到溢菌现象。 4 二、细菌病害和菌原体病害 v 有的细菌(如，韧皮部杆菌属)和植原体病害 l 扫描电镜下可观察到植物韧皮部细胞内的病原 l 用四环素类抗菌素灌注植物，病株出现一定时期的 恢复，可间接证明是植原体病害。 细菌病害病原的鉴定，必须经分离纯化后，做细 桑树黄化型矮缩病病原 Phytoplasma 葡萄皮尔氏病病原 Xylella 柑橘黄龙病病原 Liberobacter 菌学性状鉴定。 5 三、病毒病害 v 内含体确诊 有许多病毒在寄主细胞内形成内含体，可在 光学显微镜下观察识别。 6 三、病毒病害 v 病毒粒体观察 从病组织中挤出汁液，经负染后在透射电镜下观察病毒粒体形 态与结构是十分快速而可靠的诊断。 7 花生 无症状 矮花叶 无症状 菊花 不侵染 ？ 侵染 黄瓜 花叶 花叶 无花叶 三、病毒病害 v 鉴别寄主诊断 鉴别寄主 黄瓜花叶病毒 花生矮化病毒 番茄不孕病毒 黄瓜花叶病毒属三种病毒在鉴别寄主上的反应 8 四、线虫病害 u分离收集线虫 l植物器官外表、内部直接挑取 l 简单的漏斗分离方法获得 u 显微镜下辩认植物寄生线虫 l 具有吻针而区别于非寄生性线虫 9 一、柯赫氏法则的意义 u 针对不熟悉的病害，疑难病害和新病害 v观察到病斑上的微生物 v分离培养获得的微生物 v不足以证明这种生物就是病原物 v 需要采用特殊的诊断方法––––柯赫氏法则来证病 第三节 柯赫氏法则(Kochs Rule) 10 二、柯赫氏法则 1. 在任何病植物体上都能发现同一种致病的微生物，并诱 发一定的症状； 2. 必须能从病组织中分离出这种微生物，获得纯培养，并 且明确它的特征； 3. 用纯培养物接种到相同品种的健康植株上可以产生相同 病害症状(同1)； 4. 从接种发病的植物上重新分离到这种微生物(2)。 11 柯赫氏法则一般是适用证明植物病原细菌、病原真菌 的致病性。 专性寄生真菌、病毒等活养生物的致病性、以及非生 物因素的致病，就很难严格遵守法则。 实践中，原则上遵循柯赫氏法则，并作恰当调整，完 成证病。 植物病毒的证病，以提纯的病毒代替纯培养物； 白粉菌的证病，用离体叶片段上培养的孢子代替纯培养物。 三、柯赫氏法则应用的变通 12 植物线虫病害用分离的线虫代替纯培养物 有的线虫是植物病害的病原； 有的是其他病原物的传播媒介； 有的是和其他病原物共同作用形成复合侵染病害； 有的只是造成伤口，为其他病原物侵染提供条件； ► 应用柯赫氏法则弄清线虫在植物病害中的作用。 三、柯赫氏法则应用的变通 13 一、理化诊断 u 针对非侵染性病害的诊断 u诊断步骤 l 提出假设 l 证明假设 u 侵染性病害的理化诊断 l 用紫外光照射感染马铃薯环腐病的病薯薯片， 可以观察到有荧光产生。 第四节 植物病害的针对性检测 14 u 噬菌体裂解细菌细胞 l 细菌培养液由混浊变澄清； l 含菌的固体培养基上出现透明的噬菌斑； l 在10－20小时即可看到反应的结果。 u 多价噬菌体:可侵染一个属中不同种的细菌， 称为多价噬菌体； u 单价噬菌体:只能侵染同一种细菌的个别菌株， 称为单价噬菌体。 二、噬菌体诊断 15 三、血清学诊断 1. 概 念 u 血清学:是以研究抗原和抗体相互关系为基础的一门学科。 u 抗原(antigen)： 凡是能够刺激动物有机体产生抗体、并能与 所产生抗体进行专化性结合的物质称为抗原。 u 抗体(antibody)： 由抗原刺激动物机体的免疫活性细胞而生 成的，存在于血清或体液中，能够与该抗原发生专化性免疫反应 的免疫球蛋白(immunoglobulin)。 u 抗血清(antiserum)： 含有抗体的血清称为抗血清。 16 2、凝集反应 u颗粒性抗原(细菌)与其特异性抗体在电解质影响下， 很快结合成可见的凝集块。 载玻片凝集反应 试管凝集反应 载体 颗粒 抗体 17 抗血清 抗血清 抗血清 抗原1 3 抗血清 抗原1 4 抗原1 1 抗原1 2 抗原2 2、琼