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改良CTAB法提取小鼠肌肉基因组DNA
摘要: 目的:验证用改良的CTAB法提取动物肌肉基因组DNA的可行性。
方法:采用改良的CTAB法对新鲜小鼠大腿部肌肉的基因组DNA进行提取,并通 过通过电泳和紫外吸收OD2 60/OD2 8O测量提取出的DNA的纯度与含量。
结果:提取出的DNA测其吸光度值OD2 6O/OD2 8O等于1 .7 3 2, OD2 3
O/OD26O等于O.413.琼脂糖凝胶电泳得出的DNA条带清晰,效果不错。
结论:选用改良的CTAB法提取动物DNA是可行且比较容易获得成功的,大大缩 短实验时间,节省不必要的试剂的使用,简化整个实验准备程序,并降低实验成 本,可以应用于以后的教学试验中。
关键词: 改良CTAB法,小鼠肌肉,DNA提取
CTAB—improved Methods of DNA Extraction in Genome of the Mouse Muscle
Abstract: Objective: To verify with the feasibility of CTAB—improved Methods of DNA
Extraction in Genome of the Mouse Muscle. Methods: With the CTAB—improved method, genomic DNA of the fresh mouse thigh muscles was extracted,the purity and content of DNA was analysed by agarose gel electrophoresis and ratios of OD260/OD280.Results: The value of OD260 / OD280 for DNAs extracted with CTAB —improved Methods is 1.732, and the value of OD230 / OD260 is 0.413. The DNA band effect of agarose gel electrophoresis is clear and comparatively good. Conclusions: Using CTAB-improved methods of DNA in extracting genome of animals are feasible and more likely to achieve success, and shorten the time greatly, save the use of unnecessary reagent, simplify the whole experiments preparation, reduce the cost and can be used in the later teaching.
Mouse Muscle; DNA extractionKey words: CTAB—
Mouse Muscle; DNA extraction
提取动物基因组DNA的方法大都是用蛋白酶K、十二烷基硫酸钠(SDS)消化,然后用 酚、氯仿抽提,乙醇沉淀,该种方法的不足之处在于程序繁琐、耗时,而且蛋白酶K也比较 昂贵。CTAB裂解提取法常用于新鲜植物组织的DNA提取。近年来,CTAB法也逐步应用于动 植物标本和化石DNA的提取[1]。刘波等[2]用CTAB法分别对稻蝗(Oxya)的干标本和酒精浸泡 标本的DNA进行提取并获得了满意结果。Yang等[3]用3种方法提取了 Proboscidean的化石 和馆藏标本的DNA也认为用CTAB法提取化石DNA的成功率最高。但是用CTAB方法从动物 肌肉中提取基因组DNA报道甚少[4]。由于动物和植物的基因组DNA都存在于细胞核中,具 有相似的特性。尽管动植物组织有区别,提取DNA的方法应该还是可以通用的[5]。如果采 用CTAB方法能够成功提取动物基因组DNA,将大大缩短实验时间,节省不必要的试剂的使用, 简化整个实验准备程序,并降低实验成本。本实验采用改进的CTAB法对小鼠肌肉DNA进行 了提取,获得了比较满意的效果,说明改良的CTAB法提取动物肌肉基因组DNA是可行的。
新鲜的小白鼠腿部肌肉,取自中央民族大学微生物实验室。
CTAB(4gCTAB,16.364gNacl,20ml1mol/lTris-Hcl(pH8.0),8ml0.5mol/L EDTA,定容至U 200ml); 1mol/L的Tris-Hcl(pH8.0);氯仿-异戊醇(24:1);异丙醇;70%乙醇;无水乙醇;TE缓冲液; 10mg/mlRNA 酶;琼脂糖;0.5xTBE (
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