hplc法测定注射用头孢噻钠他唑巴坦钠中头孢噻和他唑巴坦的含量及其有关物质.docxVIP

hplc法测定注射用头孢噻钠他唑巴坦钠中头孢噻和他唑巴坦的含量及其有关物质 氨基乙醇钠注射液为cefotam（cf）和氨基乙醇钠注射液（tz）的复合制剂。头孢噻肟为第三代头孢菌素,他唑巴坦钠为半合成β-内酰胺酶抑制剂,与头孢噻肟钠联合用药,可以增强抑菌效果和抗菌谱。《中国药典》1995年版采用微生物检定法测定CF含量,2000年版修订为HPLC法;但未对有关物质进行要求。现用HPLC法,同时测定头孢噻肟钠他唑巴坦钠注射液中两组分的含量和有关物质。 1 实验部分 1.1 高效液相色谱法 Shimadzu Class-10VP DAD(日本岛津)和Agilent 1100系列(安捷仑科技)高效液相色谱仪。头孢噻肟对照品(中国药品生物制品检定所,96.5%);他唑巴坦系原料精制而得(92.0%);头孢噻肟钠他唑巴坦钠注射液(河南欣欣药业有限公司);乙腈为色谱纯(Merck)公司;其余试剂均为分析纯。 1.2 流动相磷酸二氢钾法 色谱柱为ZORBAX SB-C18(Agilent Technologies)(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为乙腈-磷酸二氢钾溶液(0.03 mol·L-1)-10%四丁基氢氧化铵溶液(190∶795∶15)(磷酸调pH 4.0),检测波长230 nm。理论板数按头孢噻肟峰计,应不低于3.0×104,头孢噻肟峰与他唑巴坦峰的分离度符合规定。 1.3 组分杂质峰的测定 1.3.1分别取按处方配比的辅料、CF对照品、TZ对照品流动相溶液以及注射用头孢噻肟钠他唑巴坦钠的流动相溶液各10 μl,按“1.2”色谱条件进行测定。结果辅料、CF、TZ及注射用头孢噻肟钠他唑巴坦钠各色谱峰均分离很好,见图1A～C。 1.3.2酸破坏 分别取CF、TZ对照品适量,用1 mol·L-1的盐酸溶液溶解后,室温放置0.5 h,用0.1 mol·L-1的氢氧化钠溶液中和,按“1.2”项色谱条件进行测定。结果酸破坏的CF和TZ几乎未产生新杂质峰,主成分峰与杂质峰分离良好(图1D)。 1.3.3碱破坏 分别取CF、TZ对照品适量,用0.1 mol·L-1的氢氧化钠溶液溶解,室温下立即用0.1 mol·L-1的盐酸溶液中和,按“1.2”项色谱条件测定。碱破坏的CF、TZ均与其杂质峰分离良好(图1E)。 1.3.4氧化破坏 分别取CF、TZ对照品适量,用水溶解,加10%的过氧化氢溶液适量, 30 min后用水稀释5倍,按“1.2”项色谱条件测定。结果氧化破坏的CF、TZ均与其杂质峰分离良好(图1F)。 1.4 测量 1.4.1 高效液相色谱法测定色谱图 取装量差异项下的内容物适量,精密称定,加流动相溶解并制成约含CF 0.90 mg·ml-1和TZ 0.15 mg·ml-1的溶液,照液相色谱法测定,取10 μl注入液相色谱仪,记录色谱图;另取CF和TZ对照品适量,同法测定,按外标法计算CF(C16H17N5O7S2)和TZ(C10H12N4O5S)的含量。 1.4.2 tz-1和tz3gml-1的对照溶液 照“1.4.1”项下的方法,取CF和TZ对照品适量,加流动相溶解并稀释成含CF18 μg·ml-1和TZ 3 μg·ml-1的溶液作为对照溶液,取10 μl注入液相色谱仪;另取“1.4.1”项下的溶液作为供试品溶液,同法测定,记录色谱图至主峰保留时间的2倍,供试品溶液如显杂质峰,与对照溶液的两主峰面积之和比较,最大杂质峰面积不得大于1.0%,总杂质峰面积不得大于4.0%。 1.5 色谱条件的测定 分别精密称取CF和TZ对照品适量,加流动相制成含CF 585.24、780.32、975.40 、1170.48、1365.56 μg·ml-1和含TZ 87.54、116.72、145.90、175.0、204.26 μg·ml-1的溶液,滤过,照“1.4.1”色谱条件测定,记录色谱图。以样品浓度对峰面积进行回归,回归方程分别为:ACF=162.710C+24.443(r=0.9999);ATZ=3.4288C+2.4161(r=0.9999),线性范围分别为585.24～1365.56 μg·ml-1和87.54～204.26 μg·ml-1。 1.6 加标回收率的测定 精密称取CF、TZ对照品各6份,按处方比例加入辅料,制成含CF 480 μg·ml-1、TZ 200 μg·ml-1的溶液,滤过;照“1.2”项色谱条件测定,用回归方程计算回收率。结果见表1。 1.7 精密度 取“1.6”项下的6号溶液,重复进样6次,CF和TZ峰面积的RSD=0.67%和RSD=0.79%(n=6)。 1.8 稳定性试验 取“1.7”项下的溶液,分别在0、1、2、3、4 h内测定,CF和TZ峰面积的RSD分别为0.67%、0.79%。 1.9