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dna甲基化在表观遗传学中的应用 所谓sad-a，或氨基葡萄糖（c）碱性化合物可在二甲基氧化物转化酶（a）的加速下与甲基化合物一起合成，在细胞分裂过程中传递给子细胞的表观遗传现象。由DNA腺嘌呤甲基化酶 (DNA adenine methylase, DAM) 催化形成的O6-甲基腺嘌呤 (6m A) 是一种CTAG序列复制后维持甲基化, 在细菌表观遗传过程中发挥作用, 具体功能包括染色体复制、错配修复、毒力基因表达控制、外源性基因防御等。近年发现DNA腺嘌呤甲基化还参与细菌细胞周期控制。细菌DNA腺嘌呤甲基化的具体过程及功能已经研究的比较清楚, 本文不做进一步叙述。存在于高等生物细胞内的C5-甲基胞嘧啶 (5m C) 由一组DNA甲基转移酶 (DNA methyltransferase, DNMT) 催化形成, 包括从头甲基化和DNA复制后维持甲基化两种形成途径。在成年脊椎动物体细胞中主要发生在胞嘧啶-鸟嘌呤 (G) 二核苷酸 (Cp G) 位点上; 在植物细胞和动物胚胎干细胞还可发生在非Cp G位点上。胞嘧啶甲基化在多细胞生物的细胞分化和环境适应方面发挥重要作用, 具体功能包括X染色体灭活、基因印记、基因长效沉默、细胞分化、外源基因防御、异物代谢等, 是比较活跃的研究领域之一, 近年取得了诸多研究进展。本文简要综述了DNA去甲基化的机制和DNA甲基化建立及维持研究的主要进展, 并对存在的几个关键问题进行了讨论。 1 胞监髓炎在术后模拟过程中的耐药基因 DNA胞嘧啶甲基化是一种共价修饰, 化学性质稳定。5m C有两种形成途径:DNA半保留复制后由UHRF1 (Ubiquitin-like, containing PHD and RING finger domains, 1) 招募DNMT1, 催化半甲基化DNA双链中未甲基化链的维持甲基化 (Maintenance methylation) ; 由DNMT3a和DNMT3b催化未甲基化DNA双链的从头甲基化 (de novo methylation) 。DNA去甲基化也存在被动去甲基化和主动去甲基化两种途径。细胞可通过抑制DNMT1 表达或催化活性来阻断DNA的维持甲基化, 在细胞分裂过程中稀释/降低基因组中甲基化胞嘧啶的密度, 实现被动去甲基化 (图1A) 。最近日本学者报道, 这种被动去甲基化机制是小鼠胚胎发育过程中原生殖细胞 (Primordial germ cell) 去除基因组亲本DNA甲基化的关键机制。在高等脊椎动物卵子受精后, 经过4 次卵裂, 除印记基因外, 基因组DNA将完全去甲基化, 形成全能的胚胎干细胞 (Embryonic stem cell, ESC) 。在诱导多能干细胞 (Induced pluripotent stem cell, i PSC) 形成过程中也存在类似的完全去甲基化现象。卵裂过程中如果只存在被动去甲基化, 经过4 次分裂的ESC基因组中至少还应该保留1/16 的甲基化胞嘧啶, 无法实现完全去甲基化。显然, 在胚胎干细胞中还存在其他去甲基化的机制。 胞嘧啶脱氨基酶能够催化未甲基化和甲基化胞嘧啶脱氨基, 分别形成尿嘧啶 (U) 和胸腺嘧啶 (T) 。甲基化胞嘧啶的脱氨基效率明显高于未甲基化者。胞嘧啶脱氨基是脊椎动物进化过程中基因组发生Cp G抑制 (Cp G suppression) 的主要原因。在肿瘤细胞基因组中, 大部分点突变都是Cp G位点的胞嘧啶转换成胸腺嘧啶 (C:G→T:A)。由于脱氨基形成的尿嘧啶或胸腺嘧啶与互补链上的鸟嘌呤不配对, 在正常情况下大部分将在尿嘧啶或者胸腺嘧啶DNA糖苷酶等的催化下, 按碱基切除修复 (BER) 方式修复。通过这种胞嘧啶脱氨基-碱基切除修复途径, 细胞的确有实现DNA主动去甲基化的可能。在受到感染、辐射等致癌物打击后, 宿主靶器官/组织的胞嘧啶脱氨基酶 (包括APOBEC和AID等) 含量会迅速上升, 全基因组同步低甲基化。尚不清楚这种脱氨基酶活性的升高是否为全基因组低甲基化发生的关键环节。Popp等研究表明, AID缺乏小鼠的原生殖细胞全基因组甲基化水平升高, 但是胚胎和胎盘组织的总甲基化水平无差别, 提示AID可能仅在原生殖细胞主动去甲基化过程中发挥作用。AID是胞嘧啶脱氨基酶家族的一员, 在离体条件下能够使单链DNA胞嘧啶脱氨基, 在B细胞中高表达, 促进编码免疫球蛋白Ig M的基因转化成编码Ig G的基因。该基因遗传缺陷将导致常染色体隐性遗传病——免疫缺陷综合征 (无Ig G、Ig A、Ig E, 对细菌感染高度易感) 或Ⅱ型高Ig M综合征 (HIGM2) 。在脊椎动物细胞基因组中还存在许多其他DNA胞嘧啶脱氨基酶。不同的胞嘧啶脱氨基酶有不同的DNA序列偏好, 如AID偏好WRCY