矮牵牛酵母双杂交cDNA文库构建及RTE-like互作蛋白筛选的中期报告.docxVIP

矮牵牛酵母双杂交cDNA文库构建及RTE-like互作蛋白筛选的中期报告 本研究旨在构建矮牵牛酵母（Pichia stipitis）双杂交cDNA文库，并筛选出与RTE-like互作蛋白相互作用的蛋白。在进行实验前，我们首先提取了矮牵牛酵母的全基因组DNA，并进行双链断裂和随机切割，以获得随机长度的DNA片段。然后，将这些DNA片段与转录反向的双链RNA（cDNA）结合，并使用连接酶将它们连接到载体上，最终构建了双杂交cDNA文库。 接下来，我们利用酵母双杂交系统进行筛选。具体地，RTE-like互作蛋白的C端被连接到转录因子Gal4的DNA结合区域上，而文库中的cDNA则被连接到酵母细胞表面的报告基因LacZ上。当RTE-like互作蛋白与文库中的cDNA相互作用时，拉卡菌酶（LacZ）将被表达，并转化为蓝色。然后，我们使用筛选方法，筛选出与RTE-like互作蛋白相互作用的蛋白，并对其进行鉴定和分离。 目前，我们已经完成了矮牵牛酵母双杂交cDNA文库的构建，并正在进行筛选实验。初步结果表明已经筛选出了数个潜在的与RTE-like互作蛋白相互作用的蛋白，但需要进一步验证和鉴定。我们将继续进行筛选实验，并进一步分析和鉴定筛选出的蛋白，以深入了解RTE-like互作蛋白的功能和调节机制。