巨噬细胞raw2647培养方法和电转染条件的优化.docxVIP

巨噬细胞raw2647培养方法和电转染条件的优化 mct是一个重要的免疫反应细胞，在特定免疫反应和非特异性免疫中发挥着重要作用。且年龄老化可导致肌肉巨噬细胞功能的不完整。巨噬细胞作为机体的第一道防线,在抵抗病原微生物和其他异物、保护机体的健康方面作用重大,一些疾病的发展是由于巨噬细胞中某些基因的表达量低或无表达所导致,这就需要用转基因的方法把外源基因导入巨噬细胞使其在巨噬细胞中表达,达到防治疾病的目的。 随着分子生物学技术的发展,转基因技术在畜牧业和医学领域上逐渐显示出广阔的应用前景,不仅加速了家畜品种的改良,而且提高了畜牧业产品的品质。细胞转染技术为研究特定的基因表达调控和基因定位提供了基础。常用的细胞转染方法有电穿孔法、磷酸钙沉淀法、脂质体法、逆转录病毒介导转染法等。而电转染法是一种快速,有效的将外源基因导入哺乳动物细胞或组织的转染方法,目前已被广泛应用于科学研究。但是电转染的效率受很多因素影响,包括温度、载体的结构、载体大小、浓度、细胞的数量、细胞的生长时期,电转染前后样品的静置时间,电转染仪器的参数,如电压、脉冲时间、电击次数。因此必须对转染条件进一步优化才能提高基因转染效率。虽然电转染受很多因素影响,但与磷酸钙法、阳离子性的脂质体法、显微注射法等基因转移方法相比,电转染仍然是高效转染的理想方案。笔者以巨噬细胞RAW264.7为研究对象,进一步优化电转染条件,建立一套适合