DNA重组技术基本工具课件.pptxVIP

谁能告诉我这是 What ？ 2 能否让微生物产生出人的 胰岛素等珍贵药物？ 设想 胰岛素是治疗糖尿病的特效药,长期以来只 能从猪、牛等动物的胰腺中提取， 产量低、 成本高。 而微生物生长迅速，容易控制。 能产生人胰岛素的大肠杆菌 3 经过多年的努力，科学家终于 在20世纪70年代创立了可以定向改 造生物的新技术： —基因工程 这些定向改造基因的 设想能实现吗？ 4 5 基因工程：指按照人们愿望,进行严格 设计并通过体外DNA重组和转基因等 技术，赋予生物以新遗传特性,创造出 更符合人们需要的新的生物类型和生 物产品。由于基因工程是在DNA分子 水平上进行设计和施工的，因此又叫 作DNA重组技术或基因拼接技术。 基因工程的概念 6 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 基因重组 定向地改造生物遗传性状， 获得人类所需要的品种 7 基因工程的概念 如何培养出具有抗虫性状的抗虫棉呢？ 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 苏云金芽孢杆菌 提取 普通棉花(无抗虫特性 抗虫基因 与运载体DNA拼)接， 导入 棉花细胞(含抗虫基因 抗虫棉的培育有哪些关键步骤？ 9 棉花植株(有抗虫特性 ) 表达 ) “分子缝合针”—— DNA连接酶 “分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶 “分子运输车”—— 基因进入受体细胞的载体10 解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？ 11 学 习 目 标 “分子手术刀”─限制酶 “分子缝合针”─DNA连接酶 “分子运输车”─基因进入受体 细胞的载体 12 1.来源： 主要是原核生物 2.种类： 约4000种 3.作用：识别双链DNA分子的某种特定的核苷 酸序列， 并且使每一条链中特定部位 的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 4.切割方式： 错切和平切 5.结果： 形成两种末端 一、 “分子手术刀”——限制性核酸内切酶 黏性末端 平末端 13 基因工程的“分子手术刀” 限制性核酸内切酶(限制酶) 特点：识别特定核苷酸序列，切割特定位点 如：EcoRI限制酶 专一性 14 断开磷酸二酯键 EcoR Ⅰ 黏性末端 黏性末端 15 被限制酶切开的DNA两条单链的切口， 带有几个伸出的核苷酸，他们之间正 好互补配对，这样的切口叫黏性末端 • 什么叫黏性末端？ 17 思考： 1.被同一种限制酶切断的几个DNA是否具 有相同的黏性末端？ 具有 2.不同的限制酶呢？ 形成的黏性末端不同 3.不同的限制酶切割DNA后都会形成黏 性末端？ 不一定；也有可能是平末端 18 平末端 平末端 19 断开磷酸 二 酯键 Sma Ⅰ 当限制酶从识别序列的中心轴线处切 开时， 切开的DNA两条单链的切口， 是平整的，这样的切口叫平末端。 什么叫平末端？ G A A T T C C T T A A G G A A T T C C T T A A G 同种限制酶切割形成相同黏性末端 如何连接起来？ 21 1.作用部位： 磷酸二酯键 2.种类： E ·coli DNA连接酶：只连接黏性末端 二、“分子缝合针”—— DNA连接酶 T4 DNA连接酶：连接黏性末端和平末端22 DNA连接酶的作用部位： 是磷酸二酯键(基本骨架为扶手) 不是氢键(碱基对为梯子) 23 DNA连接酶 DNA聚合酶 连接DNA链 双链 单链 连接部位 在DNA片 断之间形 成磷酸二 酯键 将单个脱氧核苷 酸加到已存在的 核酸片断形成磷 酸二酯键 比较DNA连接酶和DNA聚合酶 24 要让一个从甲生物细胞内取出来的 基因在乙生物体内进行表达，首先得将 这个基因送到乙生物的细胞内去！ 用什 么方法才能将外源基因 (目的基因) 送 入受体细胞中呢？ 1.载体作用：将目的基因转移到受体细胞 2.常用载体： 质粒、 λ噬菌体的衍生物、 三、分子运输车——基因进入 受体细胞的载体 动植物病毒等 26 质粒是基因工程常用 的载体， 一种裸露的、 结构简单、独立于染色 体或细菌拟核之外， 能自我复制的小型环状 双链DNA分子， 对宿 主细胞没有影响， 主要 存在于细菌和酵母菌体 内。 其中最常用的是大 肠杆菌质粒。 27 认识常用的载体——质粒 • 1.能够在宿主细胞中大量复制并 稳定地保存 • 2.具有多个限制酶切割切点，以 便与外源基因 (目的基因) 连接 • 3.具有标记基因，便于进行筛选 • 4.对受体细胞无害、易分离 真正被用作载体的质粒，都是在天然 质粒的基础上进行过人工改造过的！ 29 作为载体的必要条件 30 1.在基因工程中，切割运载体 和含有目的基因的DNA片段， 需使用( )