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松材线虫病对黑松种群的影响 松材线是一种毁灭性的森林疾病，主要是松草线虫，尤其是针叶植物。黑松(Pinus thunbergiiParl.)原产日本及朝鲜半岛东部沿海地区,因其耐海雾、抗海风、可在海滩上生长等特性,在我国辽宁、山东、河北、江苏、安徽、浙江、福建、湖北、广东等省大量栽植,总面积约159 300 hm2。研究证明,黑松是松材线虫病的高度感病树种,一旦松材线虫入侵,后果是毁灭性的,将给森林造成严重的、不可挽回的损失。 松材线虫入侵后,寄主黑松内栖真菌及其作用,国外特别是日本学者作了大量的研究。Kuroda和Ito研究了松材线虫侵入黑松的消长动态和病害发展过程中一些微生物的活性变化后,认为病害的发生可能与真菌无关。Noritoshi Maehara和Kazuyoshi Futai研究认为,病死木中优势真菌的种类可以决定天牛从病死木中羽化时所携带线虫的数量;2002年他们所作的另一项研究显示,松褐天牛(Monochamus alternatusHope)蛹室周围有很多蓝变菌,这些真菌能增大松材线虫的种群数量。国内有关黑松内栖真菌及其作用的研究至今还未见报道。张建平等对受松材线虫病危害的马尾松(P.massonianaLamb.)病死木进行真菌分离,并用这些真菌繁殖松材线虫,发现松材线虫可以在无孢菌和待鉴定的3株有孢菌上大量繁殖;在曲霉(Aspergillusspp.)、青霉 (Penicilliumspp.)、短梗单孢霉(Dicoccumsp.)、头孢霉(Cephalosporiumsp.)的所有菌落以及木霉(Trichodermaspp.)、轮枝霉(Verticilliumspp.)的部分菌株的菌落上不能大量繁殖。 本研究选择受松材线虫病危害的黑松为研究对象,以黑松内栖真菌区系的变化为切入点,比较在不同健康状况下黑松真菌种类、数量的差异以及变化规律,为研究松材线虫种群形成机制提供一定的理论依据,同时对松材线虫病的生物防治具有重要意义。 1 材料和方法 1.1 黑松与黑松病疫点样品采集 2004年9月,在浙江省舟山市普陀区和平湖市乍浦林场松材线虫病疫点采集黑松健康木、衰弱木和病死木样品各6株,计18株;供试黑松为30～35年生,胸径15～35 cm。 1.2 分离方法及培养 样品采集方法:胸高处(1.3 m)去掉树皮向内1 cm以上,取约2 cm厚的木片。 真菌分离方法:采用组织分离方法,每个样品取木质部组织(约0.4 cm3)各30块,用0.1%升汞溶液消毒3～5 min,无菌水清洗3～5次,置于带有PDA培养基的培养皿上,每皿5块,共6个重复,25 ℃培养,待长出菌落后纯化,观察各菌株的菌落形态、产孢特性等并作鉴定。 真菌检出率=菌落数/组织块数×100% 单位样品菌株数=菌株数/样品数 2 结果和分析 2.1 健康木中共3种真菌的组成 对6个健康木样品进行真菌分离,得到菌落35个,菌株13株,已鉴定7株13个菌落,分属于木霉(Trichoderma)、青霉(Penicillium)和盘多毛孢(Pestalotia)3个属;6株22个菌落未作鉴定。 表1表明,健康木中共有木霉、青霉、盘多毛孢以及3种待定真菌等共计6个种群的真菌;盘多毛孢、待定菌2和待定菌3等3类真菌检出率较高。 2.2 菌落木霉、青霉及3种待菌的鉴定 对6个衰弱木样品进行真菌分离,得到菌落57个,菌株16株,已鉴定12株46个菌落,分属于木霉和青霉2个属;4株11个菌落未作鉴定。 表2表明,衰弱木中真菌为木霉、青霉和2种待定菌;木霉和青霉增多,并成为优势种群。 2.3 死亡木的鉴定 对6个病死木样品进行真菌分离,得到菌落102个,菌株15株,已鉴定13株78个菌落,分属于木霉和青霉2个属;2株24个菌落未作鉴定。 表3表明,病死木中真菌为木霉、青霉和2种待定菌;木霉占据了其它真菌的生态位,成为优势种群。 2.4 不同健康状态下真菌检出情况 从表4可以看出,不同健康状态下单位样品菌株数衰弱木(2.67)病死木(2.5)健康木(2.17),对原始数据进行方差分析表明,F=1.717F(0.05)=3.682,说明不同健康状态下单位样品菌株数差异不显著;不同健康状态下真菌检出率病死木(0.57)衰弱木(0.32)健康木(0.19),对原始数据进行方差分析表明,F=6.05F(0.05)=5.143,说明不同健康状态下真菌检出率差异显著。以上数据表明,在不同健康状态下,黑松单位样品菌株数差异不显著,但真菌检出率差异显著,即随着寄主松树的死亡,真菌的检出率越来越大,也就是寄主黑松木质部中的真菌数量越来越多。 2.5 不同健康状态下真菌群落的确定 图1表明,松材线虫入侵前后,寄主黑松内栖真菌的种类有木霉、青霉、盘多毛孢、待定菌1、待定菌2、待定菌3、待定菌4及