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亲细胞非均质分子脂质兔肝内注射的实验研究 1 材料和方法 1.1 动物饲养及药品 1.1.1实验动物：21只普通新西兰兔子，由上海医科大学动物实验研究所提供。雌雄各半, 体重1.75～2.8 kg, 平均2.31±0.30 kg。饲养于福建医科大学第二临床学院动物实验室, 混合饲料及纯净水饲养。 1.1.2 药品:无水酒精, CHML-6.0 (100 mg/2ml) , 20%乌拉坦溶液。 1.1.3 小型外科手术包, 注射器, 备皮用具, 消毒用品。 1.2 试验兔的制备 将21只实验用兔随机分成三组:A组 (CHML组) 7只, 平均体重2.31±0.31 kg;B组 (CHML+无水酒精组) 7只, 平均体重2.31±0.35 kg;C组 (无水酒精组) 7只, 平均体重2.2±0.3 kg。常规消毒, 耳静脉注射20%乌拉坦, 按4 ml/kg计算用量。麻醉后备皮, 将实验兔固定于动物架上, 超声引导下经皮肝内注射药物, 选近胆囊旁、距肝包膜1 cm深处注药。A组注射CHML 0.5 ml;B组先注射CHML 0.25 ml, 然后同处注入无水酒精0.25 ml;C组注射无水酒精0.5 ml。术后饲养1周, 1周后处死, 取兔肝、肾、肺送病理检查。术前、术后3天、术后1周抽血送肝功能、肾功能检查, 并观察兔子的进食情况及体重变化。 1.3 统计方法 实验数据进行t检验,P0.05, 有统计学意义。 2 结果 2.1 一般情况 肝内注射后A组、B组、C组均存活, 无死亡, 术后麻醉苏醒约6～10小时, 健康进食, 饮水。术后7天称体重, 体重改变见表1。 2.2 其它检查 术前、术后3天及术后1周抽兔血行血清谷丙转氨酶 (ALT) 、谷草转氨酶 (AST) 、谷氨酰转肽酶 (GGT) 、尿素氮 (BUN) 、肌酐 (Cr) 检查, 采用自动生化仪检查, 结果见表2。 2.3 病理组织学检测 坏死灶呈椭圆形, 淡黄色及灰白色, 坏死区与周围组织有分界。组织学观察显示, 坏死区与正常组织之间分界清楚, 可见纤维包膜及炎性渗出细胞, 肝细胞呈水样变性、坏死, 坏死完全, 并有胶状物在胆管沉积及肉芽形成, 可见血栓内皮细胞坏死, 散在汇管区结构。肾组织切片, 肺组织切片, 未见血管内皮损伤及变性, 未见血栓形成。坏死灶大小:A组0.76±0.32 cm, B组1.01±0.26 cm, C组1.15±0.31 cm;P值B、C较A0.05, B较A 0.05。 3 chml的临床意义 CHML肝内注射导致肝内坏死, 病理显示肝细胞变性坏死, 并有胶物状肉芽及内皮细胞坏死, 有纤维包膜形成, 无血管增生。说明CHML可作为一种肝内的致坏死剂, 并且对内皮细胞有强烈作用, 证实CHML的作用机理。纤维包膜形成防止肿瘤的转移, 无血管增生也防止肿瘤细胞转移出病灶。由于未作动物模型抑制肿瘤细胞生长及免疫调节作用未验证, 但美国高立食品药品有限公司对CHML的实验研究表明CHML含有多种饱和脂肪酸及不饱和脂肪酸, 不饱和脂肪酸有抑制肿瘤细胞作用, 并通过毒性试验。有实验表明CHML无明显致突变、致畸变及致癌作用。 通过本实验肝内注射CHML后对血ALT、AST、GGT, BUN、Cr无影响, 肾、肺病理组织亦无损害表现, 说明CHML的使用具有安全性。而注射无水酒精则ALT、AST、GGT术后3天有变化, CHML较无水酒精注射无肝功能损害。本实验还发现, 无水酒精的坏死范围较CHML大。CHML合用无水酒精的坏死范围与无水酒精比较无差异, 说明合用无水酒精可以增加CHML的疗效, 可以与无水酒精达到同样效果, 但无肝功能损害, 我们也设想在临床上加以应用和验证。 通过本实验说明CHML可作为肝内注射的坏死剂, 是一种安全、可靠的药物, 可以在临床上使用, 并且合用无水酒精可以提高效果, 值得临床应用。