分子生物常用技术未修改.pptVIP

3、与噬菌体载体分子相连接 带有接头的cDNA 噬菌粒DNA 经内切酶切割 含有cDNA插入片段的重组噬菌粒DNA Molecular Biology 生命科学技术系细胞生物及遗传学教研室 本文档共87页；当前第57页；编辑于星期三\2点9分 4、噬菌粒的包装 含有cDNA插入片段的重组噬菌粒DNA 体外蛋白质外壳的包装反应 有侵染和复制能力的成熟噬菌体 进行基因组学的研究 含有某种组织或器官的噬菌粒文库 Molecular Biology 生命科学技术系细胞生物及遗传学教研室 本文档共87页；当前第58页；编辑于星期三\2点9分 Molecular Biology 生命科学技术系细胞生物及遗传学教研室 本文档共87页；当前第59页；编辑于星期三\2点9分 目的基因筛选 Molecular Biology 生命科学技术系细胞生物及遗传学教研室 本文档共87页；当前第60页；编辑于星期三\2点9分 * 南京农业大学 生命科学学院 * 第三节 基因敲除技术 1. 基本原理 经典遗传学（Forward genetics）是从一 个突变体的表型出发，研究其基因型，进而 找出该基因的编码序列。 现代遗传学（Reverse genetics，反向遗传 学）首先从基因序列出发，推测其表现型， 进而推导出该基因的功能。 基因敲除（gene knock-out）又称基因打 靶，通过外源DNA与染色体DNA之间的同源重 组，进行精确的定点修饰和基因改造，具有 专一性强、染色体DNA可与目的片段共同稳 定遗传等特点。 * * 南京农业大学 生命科学学院 本文档共87页；当前第61页；编辑于星期三\2点9分 1. 基本原理 基因敲除分为完全基因敲除和条件型基因敲除（又称不完全基因敲除）两种。 完全基因敲除是指通过同源重组法完全消除细胞或者动物个体中的靶基因活性 条件型基因敲除是指通过定位重组系统实现特定时 间和空间的基因敲除。 噬菌体的Cre/Loxp系统、Gin/Gix系统、酵母 细胞的FLP/FRT系统和R/RS系统是现阶段常 用的四种定位重组系统，尤以Cre/Loxp系统 应用最为广泛。 * * * 南京农业大学 生命科学学院 本文档共87页；当前第62页；编辑于星期三\2点9分 * * 用取代型（a）或插入型（b）载体进行完全基因敲除实验 南京农业大学 生命科学学院 本文档共87页；当前第63页；编辑于星期三\2点9分 * 南京农业大学 生命科学学院 * 正负筛选法（PNS法）筛选已发生同源重组的细胞 单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk) 南京农业大学 生命科学学院 本文档共87页；当前第64页；编辑于星期三\2点9分 三种印迹技术的比较 本文档共87页；当前第25页；编辑于星期三\2点9分 五、DNA芯片技术的概念 基因芯片(Gene chip)技术是指通过微阵列(Microarray)技术将高密度DNA片段阵列通过高速机器人或原位合成方式以一定的顺序或排列方式使其附着在如玻璃片等固相表面，以荧光标记的DNA探针，借助碱基互补杂交原理，进行大量的基因表达及监测等方面研究的最新革命性技术。 本文档共87页；当前第26页；编辑于星期三\2点9分 基因芯片 本文档共87页；当前第27页；编辑于星期三\2点9分 A. 用于微阵列芯片制作的点样仪。；B. 封装在卡盒中的微阵列芯片; C. 用于微阵列芯片荧光标记检测的激光共聚焦扫描器；D. 微阵列芯片的局部放大；E. 微阵列芯片上固定DNA探针的示意图。图中蓝色的DNA链是预先固定在芯片表面的捕获探针，红色的DNA链是与捕获探针互补的靶DNA分子。 本文档共87页；当前第28页；编辑于星期三\2点9分 生物芯片分析过程 试样处理 点阵固定 反应或杂交 芯片制作 标记 洗涤 检测扫描 光刻合成 微量点样 喷墨 纯化、标记 光化学检测 电化学检测 计算处理 本文档共87页；当前第29页；编辑于星期三\2点9分 生物芯片技术的应用 applications of biochip technology 1. 1998 年底美国科学促进会将基因芯片技术列为 1998 年度自然科学领域十大进展之一，足见其在科学史上的意义。 本文档共87页；当前第30页；编辑于星期三\2点9分 基因芯片作为一种先进的、大规模、高通量检测技术，应用于疾病的诊断，其优点有以下几个方面： 一是高度的灵敏性和准确性； 二是快速简便； 三是可同时检测多种疾病。 如应用于产前遗传性疾病检查，抽取少许羊水就可以检测出胎儿是否患有遗传性疾病，同时鉴别的疾病可以达到数十种甚至数百种，这是其他方法所无法替代的，非常有助于“优生优育”这一国策的实施。。 本文档共87页；当前第31页；编辑于星期三\2点9分