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uplc同时测定朝鲜淫羊藿中5种成分的含量 朝鲜阴阳花是科茨科的一种小唾液植物。它是《中华人民共和国药典》包含的五种医疗用途之一。该药为我国传统的补益中药,具有补肝肾、强筋骨、祛风湿的作用,临床用于阳痿遗精,筋骨痿软,风湿痹痛,麻木拘挛。朝鲜淫羊藿中不仅含有淫羊藿特有的8-异戊稀基黄酮类化合物,还含有绿原酸和金丝桃苷,且Zhao H Y等从朝鲜淫羊藿中鉴定出新绿原酸和隐绿原酸。绿原酸类化合物具有较广泛的抗菌作用,现代中医临床常用淫羊藿治疗支气管炎;金丝桃苷具有强烈的镇痛作用。沙明等采用HPLC分别测定了朝鲜淫羊藿中的绿原酸和金丝桃苷的含量,而淫羊藿中新绿原酸和隐绿原酸的含量测定笔者未见文献报道。本研究采用超高效液相色谱(UPLC)同时测定朝鲜淫羊藿中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸和金丝桃苷的含量,可在14min内完成1次色谱分析。此法快速、准确,重现性好,溶剂消耗少,为朝鲜淫羊藿的质量综合评价提供了实验依据和新的方法。 材料表面 1. ab135-s分析 Acquity UPLC(美国Waters公司,包括二元高压梯度泵、真空脱气机、自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器、Empower 2色谱工作站);Mettler Toledo AB135-S分析天平(瑞士Mettler Toled公司);Milli-Q超纯水机(美国Millipore公司)。 新绿原酸(批号:N100620)和隐绿原酸(批号:C100616),成都普瑞科技开发有限公司,绿原酸(批号:110753)和金丝桃苷(批号:111521),中国药品生物制品检定所;甲醇(色谱纯),德国Merck公司;乙酸(色谱纯),美国Tedia公司。10批朝鲜淫羊藿药材来自吉林、山西、重庆、辽宁等地。 朝鲜淫羊丸的检测试验 1. 对照品溶液的制备精确称取化学对照品新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸和金丝桃苷适量,分别置于10m L量瓶中,适量甲醇溶解,并以10%甲醇稀释至刻度,制得对照品储备液。 2. 供试品溶液的制备精密称取朝鲜淫羊藿药材粉末(过50目筛)0.1g,置具塞锥形瓶中,加入50%甲醇10m L,称定重量,超声提取1h,放至室温,补足失重,离心10min(3 000r/min)。精密吸取上述离心后上清液2.0m L两份,一份置5m L容量瓶以50%甲醇定容至刻度,以备测定金丝桃苷;另一份置5m L容量瓶中,N2吹干甲醇,加入一定量的10%甲醇超声溶解10min,以10%甲醇定容至刻度,以备测定3种酚酸类化合物,两份均用0.22μm微孔滤膜过滤,作为供试品溶液。 3. 色谱条件Waters BEH C18色谱柱(2.1mm×50mm,1.7μm);流动相为甲醇(A)-0.1%乙酸(B),梯度洗脱,0-10min,A 5%-15%,10-11min,A15%-30%,11-14min,A 30%;流速为0.4m L/min;柱温为45℃;检测波长为325nm和353nm;进样量5μL。在上述色谱条件下,对照品及朝鲜淫羊藿样品UPLC色谱图,见图1。 4. 线性关系、检测限(LOD)及定量限(LOQ)取各对照品储备液配制成含新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸和金丝桃苷分别为57.600、180.600、105.600和153.000μg/m L的混合对照品溶液,以10%甲醇稀释,得到系列对照品溶液,过滤后依前述色谱条件,进样5μL,其中金丝桃苷在353nm,新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸在325nm波长下测定。以峰面积积分值(Y)对浓度(X)进行线性回归,得到各成分的回归方程、相关系数及线性范围,将混合对照品不断稀释后分析,得到4个成分的最低检测限(LOD:SIN≈3-4)和最低定量限(LOQ:SIN≈10-12),如表1所示。 5. 精密度试验取同一份供试品溶液(山西080706),在相同色谱条件下连续进样6次,测定各色谱峰的峰面积,计算各峰面积RSD。结果新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸和金丝桃苷4种成分的RSD分别为1.481%,0.849%,0.878%和0.579%,表明仪器精密度良好。 6. 稳定性试验取供试品溶液(山西080706),于0、2、4、6、7h进样5μL,测定各色谱峰的峰面积,计算各峰RSD,结果新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸和金丝桃苷的RSD分别为1.720%,1.212%,1.363%和0.945%,表明供试品溶液中4种成分的在7h内是稳定的。 7. 重复性试验取同一朝鲜淫羊藿粉末(山西080706)6份,精密称定0.1g,按“2.”项下的方法操作制备供试品溶液,在“3.”项色谱条件下进样分析,测定各色谱峰的峰面积,计算各峰面积RSD。结果新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸和金丝桃苷的RSD分别为2.252%,1.373%,1.475%,1.691%,表明方法的重复性较好。 8. 加样