液体菌种摇瓶振荡培养技术.docx

液体菌种摇瓶振荡培养技术 培养液配制好后，装入 500mL 容量的三角烧瓶中，每瓶装量为 100mL， 并加工 0～15 粒小玻璃珠，加棉塞后再包扎牛皮纸封口，在 1.5kg/cm2 压力下灭菌 30 分钟，取出冷却到 30℃以下时，接入一块约2 平方厘米的斜面菌种，于 23℃～25℃下静置培养 48 小时，再置往复式摇床上振荡培养，振荡频率为 80～100 次/分，振幅 6cm～10cm。如果用旋转式摇床，振荡频率为 200～220 转／分。摇床室温控制在24℃～ 25℃，培养时间因菌类不同而异，一般是在7 天左右。培养结束的标准是：培养液清澈透明，液中悬浮着大量小菌丝球，并伴有各种菇类特有的香味。 一、液体菌种的检验方法 对液体菌种进行检验可采用感官检查和取样测验相结合的方法。 感官检查 可采用“看、旋、嗅”的步骤进行检查。 看：将样品静置桌上观察。一看菌液颜色和透明度，正常发酵醪液呈黄色或黄褐色，清澈透明，菌丝颜色因菌种而异，老化后颜色变深；染杂菌的醪液则混浊不透明。二看菌丝形态和大小，正常的菌丝大小一致，呈球状、片状、絮状或棒状，菌丝粗壮，线条分明；而染杂菌后，菌丝纤细，轮廓不清。三看上清液与沉淀的比例，菌丝体占比例越大越好，较好的液体菌种，在瓶中所占比例可达80%左右。四看pH 值指标是否变色，在培养液中加入甲基红或复合指标剂，经 3～ 5 天颜色改变，说明培养液 pH 值到达 4.0 左右，为发酵点；如果在 24 小时内即变色，说明因杂菌快速生长而使培养液酸度剧变。五看 有无酵母线，如果在培养液与空气交界处的瓶壁上有灰色条状附着物，说明为酵母菌污染所致，此称为酵母线。 旋：手提样品瓶轻轻旋转一下，观其菌丝体的特点。醪液的粘稠度高，说明菌种性能好；稀薄者表明菌球少，不宜使用。菌丝的悬浮力好，放置5 分钟不沉淀，表明菌种生长力强；反之，如果菌丝极易沉淀，说明菌丝已老化或死亡。再次观其菌丝状态，大小不一，毛刺明显，表明是供氧不足；如果菌球缩小且光滑，或菌丝纤细并有自溶现象，说明污染了杂菌。 嗅：在旋转样品后，打开瓶盖嗅气味。培养好的优质液体菌种， 均具有芳香气味；而染杂菌的培养液则散发出酸、甜、霉、臭等各种异味。 取样测验 可取液体菌种进行称重检查和粘度检查；生长力测定和出菇试验；化学检查，包括测 pH 值、糖含量和氧含量等；显微检查，包括细胞分裂状态观察、普通染色和特殊染色等。 二、液体菌种的使用方法 液体菌种可作原种使用，也可作栽培使用。 作原种 取一支 100ml。兽用注射器，去掉针尖，换一根内径1mm～2mm，长 100mm～120mm 的不锈钢钢管，制成一个菌种接种器。使用前，洗净接种器并用纱布包好，经高压蒸汽灭菌，冷却后抽取液体菌种即可进行接种。 经灭菌待接入菌种的原种瓶，先要在无菌条件下去掉棉塞，并改换无菌薄膜包扎瓶口。接种时，将针管插入瓶口上的薄膜，每瓶接种 量为 10mL～１5ml，要注意使液体菌种均匀分布在培养基表面，拔出针管后要立即用胶布贴封针孔，竖放在培养室的床架上进行培养。 作栽培种或直接进行栽培 液体菌种在作栽培使用时，瓶栽的每瓶接种量为 10mL～15mL；熟料袋栽的每袋接种量为，小袋 10mL～ 15mL，大袋的 20mL～30mL；开放式床栽的，每平方米接种量为 500mL～ 1000mL，不需要接种针筒，可直接均匀洒在培养料面，或进行穴播。