壳聚糖中药复合药膜治疗大鼠体表溃疡的实验研究.docxVIP

壳聚糖中药复合药膜治疗大鼠体表溃疡的实验研究 慢性溃疡，也称为难治性溃疡，是一种常见的疾病。其严重性和发病率的增加引起了国内外学者的高度关注。局部治疗是治疗皮肤溃疡的主要手段之一,我院与哈尔滨工业大学共同研制“壳聚糖中药复合药膜”,从1997年至今应用临床治疗难治性溃疡90余例,取得满意疗效,为了探讨壳聚糖中药复合药膜促进皮肤溃疡的作用机理,我们采用病理及免疫组化方法进行了动物实验研究。 1 材料和方法 1.1 动物 清洁级CCV大鼠54只,雌雄各半,体重为(200±20)g(黑龙江中医药大学动物实验室提供)。随机分为3组,每组18只。 1.2 聚糖、玉红膏、医用纤维及荧光定量聚糖 新药壳聚糖中药复合药膜(FM),含有紫草、当归、白芷、血竭、珍珠等中药有效成分及基质壳聚糖、生肌玉红膏(SH)、医用凡士林(FL),均由黑龙江中医药大学附属第一医院制药厂提供。 毛细血管内皮生长因子(VEGF),增殖细胞核抗原(PCNA)由武汉博士德公司提供;ED1抗体由北京医科大学肾病研究所赠送。 1.3 皮肤组织消毒 参照“沈道修”改良的塑料环肉芽肿定量法制成动物模型。术前用2%戊巴比妥钠按0.2 ml/100 g剂量腹腔注射麻醉大鼠,将麻醉后的大鼠俯卧于手术固定板,用8%硫化钠脱去背部毛,碘伏局部消毒后作一个横切口,切口长度应小于25 mm,用血管钳将皮肤组织分离到肌筋膜,然后用镊子轻轻拉开切口,将消毒塑料环(外径18 mm,内径16 mm,底部散边的外径25 mm)底部散边埋入切口内,最后将紧靠塑料环边缘的皮肤缝合2针,以防环脱落。 1.4 给药及给药方案 将造膜大鼠随机分为3组,分别于创面外敷壳聚糖中药复合药膜(FM组),生肌玉红膏(SH组),医用凡士林(FL组)。令药物完全覆盖塑料环内切口,每日定时换药1次,连续给药11 d。观察各组溃疡面愈合情况。 1.53 pcna、vegf的测定 于给药后4、7、11 d取各组动物创面组织。用SP免疫组化法分别检测Mδ、PCNA、VEGF的水平,按试剂盒说明操作。参照Krajewska及耿松梅的评分方法,定出四个等级。按照着色百分率计算:以0%～25%、26%～50%、51%～75%、76%～100%分别计为Ⅰ～Ⅳ。 1.6 病理检查 给药后4、7、11 d取各组动物创面组织,光镜下观察其坏死层厚度,炎性渗出层厚度,炎细胞浸润量,肉芽厚度,新生毛细血管量,纤维增生。 1.7 统计处理 采用秩和检验。 2 结果 2.1 含煤质细胞的生长 d各组病理和免疫组化 FM组坏死层较薄,炎性渗出层反应比较剧烈,肉芽长势较好,有丰富的毛细血管(见图1),并与创面垂直生长,细胞成分较多,多处于增殖期。免疫组化法检测结果显示FM组Mδ明显高于SH组及FC组(P0.01),(见表1)。 2.2 fl组的免疫组织病理 d各组病理和免疫组化 FM组与SH组肉芽生长良好,尤其FM组新生毛细血管垂直向上(见图2),并见内皮血管增生,特别是各层均有大量吞噬细胞出现(见图3),但FL组肉芽厚薄不均匀,不完整,有团块样的胶原纤维,炎细胞较多(见图4)。免疫组化法检测,FM组PCNA显著高于SH组及FL组(P0.01)。SH组的PCNA高于FL组(P0.05),(见表2)。 2.3 fl组与sh组炎细胞浸渍量与纤维运用的比较 d各组病理和免疫组化 FM组与SH组肉芽生长更旺盛,尤其是FM组的毛细血管数不断增加(见图5),但FM组的炎细胞浸润量与纤维增生低于SH组与FL组(见图6)。FL组的肉芽致密而且不完整,且深层纤维形成较多,(见图7)。免疫组化法检测结果表明:FM组VEGF明显高于SH组和FL组(P0.01),且SH组VEGF高于FL组(P0.05),(表3)。 2.4 壳聚糖中药复合药膜的制备及其稳定性 FM组的肉芽厚度逐渐增加、水肿渗出较少(见图8),新生毛细血管较多,大多直立生长且充血明显(见图9),组织纤维化的程度较低。通过免疫组化法检测Mδ、VEGF、PCNA结果显示,其指标值11 d最高,7 d较低,4 d最少(P0.05,P0.01),(见表4)。 通过各组实验结果可以看出,壳聚糖中药复合药膜起效快,药效持续时间长。生肌玉红膏相比之下,起效慢,药效持续时间短。 3 壳聚糖中药复合药膜对皮肤腐烂愈合的作用机理 壳聚糖中药复合药膜是用高科技手段把中药有效成分与基质壳聚糖相结合而成。从紫草、当归、白芷、血竭、珍珠等提取的中药有效成分具有祛腐生肌、活血止痛作用。基质壳聚糖,具有抗溃疡活性、缓释功能、抑菌作用,可以减少成纤维细胞的生长,促进内皮细胞、毛细血管再生,且能被溶菌酶降解,其降解产物N-己酰胺基-D-葡糖胺是表皮细胞生长增殖的必需营养物质,能被生物体完全吸收。壳聚糖中药复合药膜既保持了壳聚糖本身生物活性,又使其中药