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第二篇微生物学新技术在环境工程中应用演示文稿 本文档共23页；当前第1页；编辑于星期三\11点59分 优选第二篇微生物学新技术在环境工程中应用 本文档共23页；当前第2页；编辑于星期三\11点59分 第一节 固定化酶和固定化微生物在环境工程中的应用 酶是由细胞产生的能够催化生物化学反应的活性物质。酶在微生物细胞内能够发挥作用，将它提取出在体外也能发挥作用。酶制剂广泛应用于食品加工、发酵工业、印染退浆、生丝脱胶、制革、化妆品、污废水生物处理、废气生物净化等。 本文档共23页；当前第3页；编辑于星期三\11点59分 一 酶制剂剂型 （一）干燥粗酶制剂 将培养液除菌（或不除菌）后与淀粉等惰性填料混合、烦躁制成粗酶。 （二）稀液体酶制剂 将培养液过滤除去菌体杂质后直接加入稳定剂和防腐剂。 （三）浓液体酶制剂 将培养液过滤除去菌体杂质后浓缩，加入稳定剂和防腐剂。 （四）结晶酶 将酶浓缩、去杂质、纯化后在适当的温度、pH下加入铵盐或有机溶剂使其析出结晶。 （五）固定化酶 将酶和酶菌体固定在载体上，制成不溶于水的固态酶，可以较长时间使用。 本文档共23页；当前第4页；编辑于星期三\11点59分 二 酶的提取 （一）预处理 ①胞外酶：将液体培养液过滤或离心除去菌体，所得的清夜即粗酶液。如果是固态发酵，用水或缓冲液浸泡，在离心或过滤除去菌体和杂质后得到粗酶液。 ②胞内酶：破碎细胞壁和质膜，制成无细胞提取液。 （二）酶的提取 由于不同的酶的等电点、pH、温度稳定性等性质不同，提取方法也不同。 1 水溶液 提取法 2 表面活性剂提取法 3 丁醇提取法 本文档共23页；当前第5页；编辑于星期三\11点59分 （一）浓缩 葡聚糖凝胶—分子筛浓缩法、聚乙二糖浓缩法、超滤膜浓缩法、盐析或乙醇沉淀后分离。 （二）去杂质 pH沉淀法、利用蛋白质热变性的温度差异、蛋白沉淀剂法。 （三）纯化 盐析法、有机溶剂沉淀法、层析法。 （四）结晶 当酶达到一定纯度后，在适当的温度下、pH下，逐渐加入(NH4)2SO4溶液，酶可以慢慢析出结晶，也可以加入某些有机溶剂析出结晶。 三 酶的纯化 本文档共23页；当前第6页；编辑于星期三\11点59分 １.固定化酶：从筛选、培育获得的优良菌体中提取活性极高的酶，再用包埋法（或交联法、载体结合法、逆胶束酶反应系统）等方法将酶固定在载体上，制成不溶于水的固态酶，即固定化酶。 ２.固定化微生物：用固定酶的方法将酶活力强的微生物固定在载体上，即成固定化微生物。微生物本身是多酶体系的固定化载体，将整个细胞固定化更有利于保持原有活性。有死细胞固定化和生长细胞固定化两种。 ３.固定化酶和固定化微生物特性：性能稳定、降解有机物性能强、耐毒、抗杂菌、耐冲击负荷。 四 固定化酶和固定化微生物 本文档共23页；当前第7页；编辑于星期三\11点59分 水溶性酶 水不溶性载体 水不溶性 （固定化酶） 固定化技术 载体结合 交联法 包埋法 逆胶束酶 固定化酶 本文档共23页；当前第8页；编辑于星期三\11点59分 固定化技术 Ⅰ 载体结合法： 　　以共价结合、离子结合和物理吸附等将酶固定在非水溶性载体上。载体有葡聚糖、活性炭、胶原、琼脂糖、多孔玻璃珠、高岭土、硅胶、氧化铝、羧甲基纤维素等。 不溶性载体 酶 载体结合法 本文档共23页；当前第9页；编辑于星期三\11点59分 交联法： 将酶与两个以上的官能团的试剂反应形成共价键的固定方法。交联剂有：戊二醛、双重氮联苯胺和六甲撑二异氰酸酯。 交联法 固定化技术 Ⅱ 本文档共23页；当前第10页；编辑于星期三\11点59分 包埋法： 将酶包埋在凝胶微小格子（格子型）中，或将酶包裹在半透性的聚合物膜内（微胶囊型）的固定方法。格子型的包埋材料有聚丙烯酰胺、聚乙烯醇、琼脂、硅胶等。微胶囊型的包埋材料有尼龙、乙基纤维素和硝酸纤维素。 包埋法（微胶囊型） 包埋法（格子型） 固定化技术 Ⅲ 本文档共23页；当前第11页；编辑于星期三\11点59分 表面活性剂 酶 缓冲液 逆胶束酶反应系统 逆胶束酶反应系统： 表面活性剂的两性分子在有机溶剂中自发形成聚集体，其亲水性一端连接成逆胶束的极性核，水分子插入核中，其疏水性的一端进入主体有机溶剂中，酶分子溶于逆胶束中，组成逆胶束酶系统。 固定化技术 Ⅳ 本文档共23页；当前第12页；编辑于星期三\11点59分 第二节 微生物细胞外多聚物的开发与应用 微生物的胞外多聚物（Extracellular polymers, ECP）是微生