色氨酸代谢产物对肝癌细胞.pptxVIP

色氨酸代谢产物对肝癌细胞;(2)自 Tayor等提出IFN-γ对肿瘤生长得抑制作用就是其诱导色氨酸代谢所致得观点后,与色氨酸分解代谢有关得酶——吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)和肿瘤得关系开始倍受关注。; 近期得研究发现,在不同类型得肿瘤中,IDO可以扮演完全不同得角色。; 在急性髓细胞样白血病、黑色素瘤等肿瘤中,IDO可以通过抑制T细胞,从而促进肿瘤得生长;而在肝癌等肿瘤中,IDO得存在可以提高机体得抗癌细胞作用,目前这一作用得具体机制尚不十分清楚。;(3)IDO就是色氨酸分解代谢得限速酶,对色氨酸沿犬尿酸途径进行分解起到了重要作用。 IDO在多种组织中有表达,在感染、肿瘤、器官移植、自身免疫性疾病以及妊娠期间,IDO得活性增强,加速色氨酸得分解。脂多糖(LPS)、IFN-γ等细胞因子能够诱导巨噬细胞、树突状细胞等表达IDO。;IDO得分子式为:;IDO催化反应如下: 色氨酸;二 国内外研究现状: ;二 国内外研究现状:;二 国内外研究现状:;11;二 国内外研究现状: 总之,IDO抗肝癌细胞得作用机制尚处于摸索阶段,还有许多值得研究得地方。本课题将主要研究色氨酸在IDO催化下分解生成得几种代谢产物对肝癌细胞得生长和凋亡有何影响。;研究方案 ;;三 拟解决得关键问题  1 HepG2细胞得培养 2 从细胞水平来验证色氨酸得代谢产物对肝癌细胞就是否有抑制增殖、周期阻滞、诱导凋亡得作用。 3 各代谢产物浓度范围及作用时间得选定均为本试验得技术关键 4 利用高效液相色谱法对色氨酸得代谢产物进行定量分析 ;四 技术路线(第一步) 。HepG2细胞株 体外培养细胞浓度达到104/ml 分0、1,1,10,100,1000 μM/L浓度加入代谢产物?12h,24h,36h,48h后分别检测 MTT法  HepG2细胞抑制率 统计学分析;四 技术路线(第二步);四 技术路线(第三步);六? 实验方案 1 细胞培养:HepG2细胞株在DMEM培养液中传代培养。 2 加药:??培养好得HepG2细胞进行胰酶消化,制成104/ml单细胞悬液,置于反应板内,同时加药 ; (1)选定三种代谢产物(L-犬尿素、3-羟基犬尿酸、喹啉酸)进行试验。 色氨酸充足得条件下(30μM/L),将每种代谢产物分(0、1,1,10,100,1000 μM/L) 5个浓度梯度,(12h,24h,36h,48h)4个反应时间,用MTT法测细胞抑制率。绘制时间关系曲线。 另设色氨酸空白组为对照组 ;;; 4 统计学分析:统计描述:均数±标准差表示,析因设计得方差分析,样本之间比较用SNK-Q检验和t检验,P0、05有统计学意义。数据分析采用SPSS11、0软件。;本课题得创新之处 ;研究计划及预测进展 ;预期研究成果 ; 在充分得理论,成熟得实验条件,认真仔细得工作之后,相信能得到满意得结果。即使结果可能不尽人意,也会给以后得研究工作以宝贵得启示。;研究基础 ;二 实验条件 我院实验室和山西医科大学实验室具备专业得技术人员和所需得各种仪器设备,具有多年得细胞培养经验,色谱法、MTT法、流式细胞术均已成熟,可以确保实验顺利完成。三 所需经费已基本落实。