第三章_微载体培养技术.pptVIP

何谓微载体？ 指直径在60-250μm，能适用于贴壁细胞生长的微珠。一般是由天然葡聚糖或者各种合成的聚合物组成。 原理： 将对细胞无害的颗粒-微载体加入到培养容器的培养液中，作为载体，使细胞在微载体表面附着生长，同时通过持续搅动使微载体始终保持悬浮状态。 回想一下： 本文档共47页；当前第31页；编辑于星期三\9点55分 一、微囊法（microencapsulation）: 用一层亲水的半透膜将细胞包围在珠状的微囊里，细胞不能逸出，但小分子物质及营养物质可自由出入半透膜；囊内是种微小培养环境，与液体培养相似，能保护细胞少受损伤，故细胞生长好、密度高。 第四章 动物细胞的微囊化培养 本文档共47页；当前第32页；编辑于星期三\9点55分 图4－1 　微胶囊示意图 微胶囊膜 生物大分子 代谢产物 细胞 营养物质 本文档共47页；当前第33页；编辑于星期三\9点55分 二、研究发展历程 1、首次报道生物活性物质的微囊化研究（1957）： 将酶、蛋白质和激素等生物活性物质包封在选择性透过膜中，形成球状微胶囊, 称之为“生物微胶囊”。通过微胶囊膜的选择透过作用, 使囊外大于某一分子量的物质不能扩散进入, 而生物环境中的营养成分和囊内生物活性物质或细胞分泌的小分子产物可以自由出入微胶囊, 从而达到免疫隔离目的。 本文档共47页；当前第34页；编辑于星期三\9点55分 2、“人工细胞” ——“人工胰腺” 80年代初, Lim等人将微囊化技术与组织细胞移植相结合, 制备了海藻酸钠/聚赖氨酸(APA)微胶囊, 包埋猪胰岛细胞形成“人工细胞”, 并移植入糖尿病大鼠体内, 结果成功地调节了血糖水平, 代行了大鼠胰腺功能, 因而被称为“人工胰腺”。该成果较好地解决了组织细胞移植过程的免疫排斥问题, 避免或减少了昂贵的免疫抑制剂的使用, 为组织细胞移植治疗神经/内分泌系统疾病提供了新思路。 本文档共47页；当前第35页；编辑于星期三\9点55分 3、90年代以来, 医学界开始尝试以微胶囊作为基因重组细胞的免疫隔离和运载工具, 利用重组细胞的代谢产物调节机体生理功能, 治疗相关疾病。 微囊化人胰岛 培养15d 微囊化小牛肾上腺嗜铬细胞 培养10d 微囊化肝癌细胞 培养40d 本文档共47页；当前第36页；编辑于星期三\9点55分 4、目前，微胶囊的应用研究涉及药物控制释放、 动植物细胞培养、细胞和酶的固定化以及生化物质分离等领域, 已经成为材料、化学、化工、生物和医学等多学科领域工作者的研究热点。 SEM下微胶囊的显微形貌 ×200 LSCM下微胶囊表面形貌的照片 本文档共47页；当前第37页；编辑于星期三\9点55分 最初采用在培养液中加入一定数量的小滚瓶，增加细胞生长的贴壁面积。 此方法构造简单，成本低，重复性好，放大过程可依靠滚瓶数量的增加。 但产率低，劳动强度大，占空间大。 如何增加细胞生长的贴壁面积？ 微载体系统 本文档共47页；当前第1页；编辑于星期三\9点55分 1967年被用于动物细胞大规模培养。 兼具悬浮培养和贴壁培养的优点，放大容易。 现广泛用于培养各类细胞，生产疫苗、蛋白质产品。 微载体培养系统 培养4h，微载体间的细胞“桥联” ×200 电镜下串在一起的肝细胞微载体×730 由于肝细胞的粘附作用微载体形成“串珠” ×400 脊髓灰质炎、狂犬和乙脑等疫苗 本文档共47页；当前第2页；编辑于星期三\9点55分 二、微载体的商品类型 第一种微载体： Van Wezel用DEAE-Sephadex A50研制而来 市售（国际）种类有十几种以上： 液体微载体、大孔明胶微载体、聚苯乙烯微载体、PHEMA微载体、甲壳质微载体、聚氨酯泡沫微载体、藻酸盐凝胶微载体以及磁性微载体等 常用商品化微载体有三种： Cytodex1、2、3，Cytopore和Cytoline 本文档共47页；当前第3页；编辑于星期三\9点55分 显微镜下的高密度微载体 本文档共47页；当前第4页；编辑于星期三\9点55分 优良的微载体应具有的特性 价廉，能重复使用。 不含能毒害细胞的成分； 微载体须与细胞有良好的相容性； 密度应略大于培养基； 粒径在40～120μm范围，生理盐水溶胀后增大到60~250 μm，粒度分布地均匀，径差不大于20~25μm； 良好的光学透明性； 能在PBS中耐120~125℃、20~30min高温灭菌； 应是非刚性材料； 不吸收培养基中的营养成分； 收获细胞或细胞制品容易，不影响蛋白质分离纯化； 本文档共47页；当前第5页；编辑于星期三\9点55分 三、微载体培养原理与操作 1、原理： 将对细胞无害的颗粒——微载体加入到培养容器的培养液中，作为载体，使细胞在微载